Endonucléase

Utilisée dans des conditions de réaction appropriées, l'endonucléase Benzonase^® dégrade toutes les formes d'ADN et d'ARN (monocaténaires, biconcaténaires, linéaires et circulaires) en oligonucléotides d'une longueur d'environ trois à cinq paires de bases. Elle présente un niveau d'activité spécifique exceptionnellement élevé, sans aucune activité protéolytique détectable.

Avec certaines matrices de fabrication, l'utilisation d'une concentration en sel supérieure aux niveaux physiologiques (200 mM de NaCl) peut s'avérer bénéfique. L'endonucléase Benzonase^® Salt Tolerant permet d'utiliser des concentrations en sel comprises entre 200 mM et 1 000 mM de NaCl pour l'étape de lyse en milieu de processus et de digestion de l'ADN lors de la production de vecteurs à base de virus adéno-associés (AAV). Ce nouvel ajout à la gamme Benzonase^® est compatible avec tous les détergents testés, y compris les détergents Deviron^®, qui constituent une alternative au Triton™ X-100.

Applications en
bioprocédés

L’endonucléase Benzonase^® est parfaitement adaptée aux applications de biotransformation exigeantes. Elle dégrade les acides nucléiques en fragments bien inférieurs à la taille de 200 paires de bases requise par l’Organisation mondiale de la santé (OMS) et la Food and Drug Administration (FDA) américaine ; elle est commercialisée dans le respect des conditions GMP IPE-PQG et dispose d’un dossier maître de médicament (Drug Master File) enregistré auprès de la FDA, qui peut être cité dans les dossiers réglementaires.

Elle est efficace dans un large éventail de conditions de fonctionnement et d’applications, notamment :

• La purification des vaccins viraux et des vaccins à vecteur viral
• La purification des thérapies cellulaires et géniques
• La purification des virus oncolytiques
• L'élimination de l'ADN et de l'ARN des protéines et autres produits biologiques
• L'élimination de l'ADN de la cellule hôte

Trois versions de l’endonucléase IPEG PQG GMP Benzonase^® sont disponibles pour répondre à différents besoins de fabrication. Toutes font partie du programme Emprove^® qui facilite la préparation des documents destinés aux demandes d’autorisation réglementaires (tableau 1).

Les endonucléases Benzonase^® sont produites dans le système d’expression E. coli W3110 et présentent un risque minimal de contamination virale.

• Endonucléase Benzonase^® Emprove^® Expert
• L’endonucléase Benzonase^® Safety Plus Emprove^® Expert est produite dans un milieu chimiquement défini et chaque lot est testé pour vérifier l’absence de virus adventices et de mycoplasmes.
• L’endonucléase Benzonase^® Salt Tolerant est également produite dans un milieu chimiquement défini et chaque lot est testé pour détecter la présence de mycoplasmes ; des tests de dépistage des virus adventices sont disponibles sur demande.

Applications de recherche

L'endonucléase Benzonase^® peut être utilisée pour diverses applications de recherche, notamment :

• L'élimination de l'ADN de l'hôte dans les échantillons de microbiome
• L'amélioration de l'identification des taxons microbiens dans le cadre d'études sur le microbiome
• Prévention de l'agglomération lors de la recherche sur les vaccins
• La réduction de la viscosité du lysat au cours des processus d’extraction de protéines recombinantes, ce qui permet d’améliorer le rendement de la protéine cible

Diverses options d’endonucléase Benzonase^® de haute pureté et à forte concentration sont disponibles.

L’endonucléase Benzonase^® est également proposée dans des kits comprenant des réactifs d’extraction de protéines afin de faciliter davantage les protocoles.

• BugBuster^® Master Mix : réactif d’extraction de protéines BugBuster^® avec endonucléase Benzonase^® et solution de rLysozyme
• Réactif d’extraction de protéines BugBuster^® HT : réactif d’extraction de protéines BugBuster et endonucléase Benzonase^®
• Kit CelLytic™ B Plus : lysozyme, endonucléase Benzonase^® et inhibiteurs de protéases