Análisis de la salud celular
Los reactivos, kits y herramientas de análisis de la salud celular miden indicadores generales y específicos del vigor de los cultivos celulares. Los ensayos de viabilidad pueden utilizarse como medida general de la salud celular o para evaluar los efectos del tratamiento junto con los ensayos de citotoxicidad. Los ensayos de proliferación suelen utilizar la síntesis de ADN y la división celular como medida de la actividad metabólica de las células como resultado de condiciones o tratamientos. Los kits de citotoxicidad pueden emplear lecturas de biorreducción para evaluar la actividad metabólica.
La contaminación de los cultivos es una de las barreras más comunes para un cultivo celular eficiente y fiable. Aunque algunos contaminantes pueden detectarse mediante una inspección microscópica concienzuda de los cultivos, contaminantes como el micoplasma eluden los métodos de detección visual. Por lo tanto, los cultivos deben examinarse de forma rutinaria utilizando kits y reactivos que detecten de forma fiable los contaminantes microbianos. Los reactivos que minimizan y eliminan la contaminación cuando se produce son elementos esenciales de la sala de cultivo que aumentan la técnica estéril y las buenas prácticas de la sala de cultivo.
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Ensayos de viabilidad y proliferación celular
Los ensayos para medir proliferación y viabilidad celular se utilizan para monitorizar la respuesta y la salud de las células en cultivo tras el tratamiento con diversos estímulos. La elección adecuada de un método de ensayo depende del número y tipo de células que se vayan a evaluar, así como del resultado esperado. Los ensayos de proliferación celular pueden controlar el número de células a lo largo del tiempo, el número de divisiones celulares, la actividad metabólica o la síntesis de ADN. El recuento celular mediante colorantes de viabilidad como azul tripán o calceína-AM puede proporcionar tanto la tasa de proliferación como el porcentaje de células viables. El éster N-succinimidílico de 5(6)-diacetato de carboxifluoresceína (CFSE) (21888, SCT110) es una opción popular para medir el número de divisiones celulares que ha sufrido una población. Al entrar en la célula, las esterasas intracelulares escinden el CFSE para formar el compuesto fluorescente, y el grupo succinimidil éster reacciona covalentemente con las aminas primarias de las proteínas intracelulares. En cada división, la intensidad de la fluorescencia de cada célula hija se reduce a la mitad, lo que permite la detección sencilla del número de divisiones celulares mediante citometría de flujo.
La CFSE se escinde en las esterasas intracelulares para formar el compuesto fluorescente.
Metabolismo del MTT a una sal de formazán por células viables como se muestra en una placa de 96 pocillos.
Nuestras completas herramientas y soluciones para medir la viabilidad y proliferación celular emplean diversos métodos, e incluyen:
- DNA Synthesis Proliferation Assays
- Metabolic Proliferation Assays
- Luminescent Cell Viability Assays
- Ensayos de proliferación con colorantes fluorescentes
- Tinción triple de células vivas/muertas/totales para cultivos en 3D
- Cuento de viabilidad por exclusión del colorante azul tripán
Ensayos de citotoxicidad
Los ensayos que miden la actividad metabólica son adecuados para analizar la proliferación, la viabilidad y la citotoxicidad. La reducción de sales de tetrazolio como MTT y XTT a compuestos de formazán coloreados o la biorreducción de resazurina (R7017, TOX8) sólo se produce en células metabólicamente activas. Las células que proliferan activamente aumentan su actividad metabólica, mientras que las células en dificultades, como las expuestas a toxinas, mostrarán una actividad disminuida.
Ensayos de apoptosis
La muerte celular es necesaria para muchas funciones fisiológicas normales en el curso tanto del desarrollo como de la homeostasis. La capacidad de las células tumorales para eludir la muerte celular programada, también conocida como apoptosis, es una característica distintiva de la mayoría de los tipos de cáncer. Una amplia variedad de proteínas celulares, incluidos receptores de la superficie celular, adaptadores, proteasas y componentes mitocondriales, regulan un delicado equilibrio entre la supervivencia celular y la muerte por apoptosis. Una selección cuidadosa de los ensayos puede ayudar a analizar no sólo los efectos de las condiciones de cultivo celular y los tratamientos sobre la salud celular, sino también los mecanismos por los que afectan a la salud celular. Ofrecemos una gama completa de productos de ensayo para detección de la apoptosis.
Detección y eliminación de la contaminación celular
El mantenimiento de cultivos celulares libres de contaminación es fundamental para la investigación basada en células. Entre los problemas más generalizados de los cultivos celulares se encuentra la contaminación por micoplasma, un género de bacterias cuya morfología se caracteriza por un tamaño submicrónico y la ausencia de pared celular, lo que hace que estas bacterias sean difíciles o imposibles de detectar mediante microscopía y resistentes a muchos antibióticos. Aunque los micoplasmas no suelen causar la muerte celular, son responsables de una serie de efectos en las células cultivadas que incluyen un metabolismo desregulado, una proliferación reducida y aberraciones cromosómicas. En resumen, la contaminación por micoplasmas compromete la validez de las líneas celulares afectadas para proporcionar datos significativos para la investigación en ciencias de la vida.
La contaminación por micoplasmas es una de las principales causas de muerte celular.
Nuestras herramientas para detección y eliminación de micoplasmas incluyen:
- LookOut® Mycoplasma PCR Detection Kit y otros kits de PCR y qPCR para el desenmascaramiento fiable y sensible de micoplasmas en cultivos celulares
- Caldo de fosfato de criptose y otros reactivos para la detección por cultivo de micoplasmas
- Diagnóstico de micoplasmas en cultivos celulares
- Tinturas de ADN para la detección de micoplasmas mediante el método de tinción de ADN fluorescente
- LookOut® Mycoplasma Erase spray y reactivos para la descontaminación de micoplasmas
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