Anticorps anti-phospho-ubiquitine (Ser65)

Produit évalué par western blotting sur des cellules HeLa exprimant PINK1.

Analyse par western blotting : Une dilution au 1/1 000e de cet anticorps a permis de détecter l'induction de la phosphorylation du résidu Ser65 de l'ubiquitine cellulaire dans 10 µg de lysat de cellules HeLa exprimant PINK1 après traitement au CCCP (réf. 215911).

Analyse par immunocytochimie : Une dilution au 1/500e d'un lot représentatif a permis de détecter la phosphorylation de l'ubiquitine au niveau de Ser65 induite par traitement au CCCP (réf. 215911) dans des cellules HeLa exprimant PINK1.

Analyse par western blotting : Une dilution au 1/5000e d'un lot représentatif a permis de détecter la phosphorylation d'une ubiquitine recombinante au niveau de Ser65 catalysée par la protéine GST-PINK1.

Analyse par immunocytochimie : Une dilution au 1/200e d'un lot représentatif a permis de détecter de la phospho-ubiquitine (Ser65) dans des cellules HeLa exprimant PINK1 avec et sans traitement au CCCP (avec la permission du Dr Noriyuki Matsuda).

Détectez la phosphorylation du résidu Ser65 de l'ubiquitine avec cet anticorps polyclonal de lapin anti-phospho-ubiquitine (Ser65), réf. ABS1513-I, validé en immunocytochimie et western blotting.

Cet anticorps polyclonal détecte uniquement l'ubiquitine (Ub) phosphorylée au niveau de Ser65 ainsi que les protéines ubiquitinylées (oligoUb et polyUb y compris) contenant de l'ubiquitine phosphorylée au niveau de Ser65. Aucune réactivité vis-à-vis de l'Ub ou des protéines ubiquitinylées en l'absence de phosphorylation du résidu Ser65 de l'Ub.

Devrait réagir avec un large éventail d'espèces du fait de l'homologie de séquences à 100 %.

L'ubiquitine (Ub) est initialement produite sous la forme d'une protéine de 229 a.a. précurseur de la polyubiquitine B (UniProt P0CG47) et codée par le gène UBB (ID gène : 7314), ou sous la forme d'une protéine de 685 a.a. précurseur de la polyubiquitine C (UniProt P0CG48) et codée par le gène UBC (ID gène : 7316) chez l'homme. Les extrémités C-terminales de la polyubiquitine B (Cys229) et de la polyubiquitine C (Val685) sont retirées après traduction, puis les composés subissent d'autres clivages post-traductionnels pour donner de multiples copies de molécules d'ubiquitine (aussi connue sous le nom de protéine non-histone 20 du groupe à haute mobilité ou HMG-20) identiques de 76 acides aminés (trois copies par polyubiquitine B et neuf copies par polyubiquitine C). Les modifications covalentes de protéines cibles via différents résidus Lys de l'Ub sont des événements bien documentés qui se produisent durant la réparation de l'ADN cellulaire, la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), l'activation de la transcription, et la dégradation lysosomale et protéasomale. PINK1 ("PTEN induced putative kinase 1") est une Ser/Thr kinase qui s'accumule spécifiquement dans les mitochondries dépolarisées, où elle sert de régulateur positif de l'activité de la parkine (Park2), une ubiquitine (Ub) ligase E3, en phosphorylant l'Ub au niveau du résidu Ser65 ainsi que le résidu Ser correspondant du domaine UBL ("Ub-like", semblable à l'ubiquitine) N-terminal de la parkine. L'Ub phosphorylée interagit avec la parkine phosphorylée au niveau de son domaine GINGO0 de manière allostérique, induisant un changement de conformation et faisant apparaître la cystéine catalytique du domaine RING2 de la parkine pour obtenir une activité ligase complète. Une étude conformationnelle par RMN révèle que l'Ub phosphorylée au niveau de Ser65 existe sous deux conformations en solution. La principale conformation présente des propriétés de surface altérées, tandis que la seconde conformation de la phosphoUb comporte une queue C-terminale rétractée par deux résidus dans la partie centrale de l'Ub. La phosphorylation au niveau de Ser65 de l'Ub a peu d'effet sur la charge des enzymes E2 médiée par les enzymes E1 et affecte essentiellement la décharge des enzymes E2 pour former des chaînes de polyUb. En outre, il a été montré que la majorité des désubiquitinases (DUB), notamment USP8, USP15 et USP30, présente une activité altérée contre la poly-phosphoUb liée par le résidu Lys63.

Poids réel (observé) : ~17/ 8 et ~ 45-250 kDa. Poids théorique (calculé) : 8,565 / 17,112 / 25,66 / 34,21 kDa (mono / di / tri / tétra-ubiquitine). Les bandes ~45-250 kDa représentent les protéines ubiquitinylées contenant de l'Ub phosphorylée au niveau de Ser65. Des bandes non caractérisées peuvent être observées avec certains lysats.

Peptide linéaire conjugué à de la KLH correspondant à la séquence de la région cible de l'ubiquitine contenant un résidu Ser65 phosphorylé.

Remplace : ABS1513