Facteur inhibiteur de la leucémie, de souris

Le facteur inhibiteur de la leucémie (LIF) est un facteur lymphoïde qui favorise le maintien à long terme des cellules souches embryonnaires en supprimant la différenciation spontanée. Le LIF présente un certain nombre d'autres activités, notamment la différenciation des neurones cholinergiques, le contrôle de la pluripotence des cellules souches, le métabolisme osseux et le métabolisme des graisses, la mitogenèse de certaines lignées cellulaires facteur-dépendantes et la promotion de la production de mégacaryocytes in vivo. Le LIF de souris est une protéine de 22 kDa contenant 203 résidus d'acides aminés.

Origine du produit : le mLIF est exprimé dans E. coli sous la forme d'une protéine de fusion avec de la GST à l'aide du système d'expression pGEX, clivé de la fraction GST par la thrombine puis purifié par plusieurs étapes de FPLC.

50 µg, protéine LIF de souris recombinante, exprimée dans E. coli, convenant à la culture de cellules souches

Domaine de recherche
Recherche sur les cellules souches

PROTOCOLE DE QC

Essai biologique M1

1. L'essai biologique M1 est réalisé à l'aide de cultures in vitro sur gélose semi-rigide, comprenant environ 300 cellules dans des volumes de 1 ml de DME contenant 20 % de FCS dans de la gélose à 0,3 %.

2. Ajouter 100 μl d'échantillon ou de mLIF (10(E4) unités/ml dans du FCS à 5 % dans une solution saline isotonique) à des dilutions en série au 1/2 en duplicats dans des boîtes de Petri de 35 mm.

3. Ajouter à deux lames de contrôle 100 μl de FCS à 5 % dans une solution saline isotonique.

4. Incuber à 37 °C pendant 7 jours dans une atmosphère entièrement humidifiée constituée de CO2 à 10 % dans de l'air.

5. Compter le nombre de colonies présentant une différenciation (remarque : par définition, 50 unités correspond à la quantité d'activité entraînant une différenciation de 50 % des colonies).

En solution dans du PBS à pH 7,4 contenant 0,02 % de Tween 20. Aucun conservateur ajouté.

Conserver entre 2 et 8 °C pendant 6 à 12 mois. D'autres dilutions doivent être réalisées dans du tampon ou du milieu additionné de protéine (1 % de BSA par exemple) ou de Tween 20.

A donné un résultat négatif lors de tests aseptiques et de tests de mycoplasmes.

Activité spécifique : L'activité du LIF de souris est déterminée par sa capacité à induire une différenciation chez des cellules de leucémie myéloïde M1 murines. La concentration de LIF de souris minimale pouvant être détectée dans cet essai est de 0,5 ng/ml.

Activité spécifique : par définition, 50 unités correspond à la quantité de LIF de souris requise pour induire une différenciation chez 50 % des colonies de cellules du type M1 dans des cultures sur gélose de 1 ml.

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