Anticorps anti-dynéine, chaînes intermédiaires de 74 kDa, cytoplasmique, clone 74.1

La dynéine cytoplasmique 1 à chaîne intermédiaire 1 (UniProt Q29RQ3 ; également nommée dynéine cytoplasmique à chaîne intermédiaire 1, dynéine à chaîne intermédiaire 1, cytosolique, DH IC-1) et la dynéine cytoplasmique 1 à chaîne intermédiaire 2 (UniProt Q0III3 ; également nommée dynéine cytoplasmique à chaîne intermédiaire 2, dynéine à chaîne intermédiaire 2, cytosolique, DH IC-2) sont codées par les gènes DYNC1I1 (identifiant du gène 613724) et DYNC1I2 (identifiant du gène 526329), respectivement, chez les bovins. Les complexes de dynéine cytoplasmique sont des moteurs de transport rétrograde associés aux microtubules. La dynéine cytoplasmique 1 est le moteur le plus abondant dans les cellules, tandis que la dynéine cytoplasmique 2 participe au transport intraflagellaire. La dynéine cytoplasmique 1 est un complexe à sous-unités multiples d'environ 1,5 MDa composé d'un homodimère de chaînes lourdes (codé par DYNC1H1), de deux chaînes intermédiaires (codées par DYNC1I1 et DYNC1I2), de chaînes légères à intermédiaires (codées par DYNC1LI1, DYNC1LI2) et de chaînes légères (codées par les gènes DYNLT1, DYNLT3, DYNLRB1, DYNLRB2, DYNLL1, DYNLLl2). L'homodimère de chaînes lourdes agit comme le principal complexe dynéine et lie les microtubules pour permettre le déplacement de la dynéine cytoplasmique dépendant de l'ATP. Les autres sous-unités de dynéine s'associent sous forme d'homodimères et ont des rôles de régulation pour maintenir la stabilité du complexe, moduler son activité et médier ses interactions avec les protéines accessoires et cargo. Les protéines à chaîne intermédiaire (IC1 et IC2) interviennent dans la liaison et la spécificité du chargement, isolément ou via une interaction avec le complexe dynactine. IC1 et IC2 partagent 69 % de leur identité protéique. Elles interagissent avec les chaînes légères de la dynéine et la sous-unité p150 de la dynactine à l'extrémité N-terminale, et avec les chaînes lourdes via les répétitions de WD40 à l'extrémité C-terminale de la chaîne intermédiaire.

Poids réel (observé) : env. 74 kDa.

Immunocytochimie :
une dilution au 1/50e-1/100e d'un lot antérieur a été utilisée. Réagit avec des cellules MDCK, NRR, N1E, et PTK-1 mises en culture.

Immunoprécipitation :
10 µl d'un précédent lot ont été utilisés pour 0,5 gm de tissus. L'anticorps monoclonal immunoprécipite proprement l'ensemble du complexe dynéine de façon stœchiométrique à partir de lysats TX-100 ou NP-40 (comprenant la chaîne lourde de 530 kD, les chaînes intermédiaires légères et les chaînes légères) de divers tissus et lignées cellulaires mises en culture. Si l'on utilise des produits détergents comme le SDS pour préparer les lysats, les seules sous-unités de la dynéine qui sont immunoprécipitées sont les sous-unités IC74 (vraisemblablement parce que le complexe dynéine se dissocie), et d'autres protéines contaminantes peuvent être observées dans les immunoprécipités de SDS.

Immunoblotting :
dilution au 1/1 000e-1/5 000e. Réagit avec des cellules MDCK, PC-12, N1E, des neurones, des cellules gliales et d'autres cellules mises en culture.

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

L'anticorps anti-dynéine, 74 kDa, à chaînes intermédiaires, cytoplasmique, clone 74.1, permet de détecter les niveaux de dynéine et son utilisation a fait l'objet de publication et a été validée en immunocytochimie, immunofluorescence, immunoprécipitation et western blotting.

Produit non testé sur des poulets, des nématodes ou Dictyostelium.

Format : Produit purifié

IgG2b monoclonale de souris purifiée, dans un tampon contenant du phosphate de sodium 20 mM, du NaCl 250 mM, pH 7,6, avec 0,1 % d'azoture de sodium comme conservateur.

Témoin
Cellules HeLa, lysat de cellules A431

Évaluée de routine par western blotting sur des lysats de cellules A431.

Analyse par western blotting :
une dilution au 1/500e de ce lot a permis de détecter la DYNÉINE dans 10 µg de lysat de cellules A431.

Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, voir le certificat d'analyse.

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