ANTI-TAU (MAPT) Antibody

Témoin
Tissu cérébral atteint de maladie d'Alzheimer (il est recommandé de procéder à une déphosphorylation à la phosphatase alcaline pour colorer les enchevêtrements neurofibrillaires de ces tissus) ou cellules de glioblastome T98G humain.

Domaine de recherche
Neurosciences

L'anticorps anti-tau-1, clone PC1C6, est un anticorps dirigé contre la protéine Tau-1. Il est cité dans plus de 65 références bibliographiques et est destiné à l'IH et au WB.

Sous-domaine de recherche
Maladies neurodégénératives

Western blotting : Des protéines de microtubules de cerveau bovin purifiées par deux cycles d'assemblage et de désassemblage (9) sont dissoutes dans un tampon à échantillon pour SDS-PAGE. Cinq microgrammes de préparation de microtubules par piste sont chargés sur un gel de SDS-PAGE avec gradient de 4 % à 20 %, de même que des marqueurs de poids moléculaire (14,3-200 kD). Après séparation par électrophorèse, les protéines sont transférées sur de la nitrocellulose. La protéine Tau est détectée sous la forme d'une série de 5 bandes (52-68 kD) avec environ 5 ng/ml d'anticorps anti-tau-1.

Immunofluorescence : Une dilution au 1/1000e de cet anticorps a permis de détecter la protéine Tau dans des neurones primaires de souris. (Basnet, N., et al. (2018). Nat. Cell Biol. 20(10); 1172-1180.

Immunohistochimie : 5 μg/ml ; colore principalement les axones des tissus, cependant, en culture, l'expression de Tau ne se limite pas uniquement aux axones.

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

Protocole d'immunohistochimie

Déphosphorylation de coupes de tissus (facultatif)

Il est recommandé de procéder à une déphosphorylation à la phosphatase alcaline pour colorer avec l'anticorps anti-tau-1 les enchevêtrements neurofibrillaires des tissus cérébraux atteints de maladie d'Alzheimer (6). Ce traitement modifie le schéma de coloration de l'anticorps anti-tau-1 en incluant les corps cellulaires, les dendrites et les axones des neurones. Dans les échantillons non traités, l'anticorps anti-tau-1 ne colore que les axones.

1. Incuber les coupes de tissu à +32 °C pendant 2,5 heures sous agitation constante dans la solution suivante : Tris-HCl 100 mM à pH 8,0, 130 unités/ml de phosphatase alcaline, PMSF 1 mM, 10 μg/ml de pepstatine et 10 μg/ml de leupeptine.

2. Procéder à 2 rinçages des coupes de 3 min chacun dans du Tris-HCl 100 mM à pH 8,0.

Coloration avec l'anticorps anti-tau-1

1. Bloquer les liaisons non spécifiques en incubant les coupes dans du PBS contenant 1 % (v/v) de sérum animal normal et 0,03 % (p/v) de Triton X-100. Le sérum animal doit être de la même espèce que l'anticorps secondaire.

2. Procéder à 3 rinçages de 3 min chacun avec du PBS.

3. Incuber les coupes avec l'anticorps anti-tau-1 à environ 5 μg/ml, dilué dans du PBS contenant 1 % (v/v) de sérum animal normal.

4. Laver au PBS, en remplaçant trois fois la solution sur une durée de 3 min.

5. Procéder à la détection avec un système de détection à anticorps secondaire standard (10-13).

L'anticorps anti-Tau-1, clone PC1C6 se lie à toutes les espèces électrophorétiques de la protéine tau du cerveau humain, de rat et de bovin (SDS-PAGE à une dimension). Il existe toutefois un certain biais avec le clone PC1C6 qui semble ne reconnaître que les sites à sérine déphosphorylée 195, 198, 199 et 202 {Szendrei, et al 1993; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi-cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=7680727}. Voir également Billingsley et Kincaid, 1997 Biochem J 323:577-591, pour des informations complémentaires sur la localisation de PC1C6.

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5 bandes (52–68 kDa)

Tau, une protéine de liaison aux microtubules qui sert à stabiliser les microtubules des axones en croissance, est hyperphosphorylée dans les filaments hélicoïdaux appariés (PHF), principal constituant fibreux des lésions neurofibrillaires associées à la maladie d'Alzheimer. L'hyperphosphorylation de Tau serait l'événement crucial qui mène à l'assemblage des PHF. Six isoformes ont été identifiées pour la protéine Tau, toutes phosphorylées par la glycogène synthase kinase 3 (GSK 3). Localisation cellulaire et subcellulaire : In situ, l'anticorps anti-tau-1 est extrêmement spécifique des axones des neurones. L'anticorps ne colore pas les corps cellulaires ou les dendrites des neurones, ni tout autre type de cellule (4). Cette spécificité intracellulaire in vivo n'est cependant pas conservée en culture : l'anticorps anti-tau-1 colore ainsi l'axone, les corps cellulaires et les dendrites des neurones d'hippocampe de rat en culture (5). On pensait initialement que la spécificité de l'anticorps anti-tau-1 représentait l'expression de tau limitée aux axones. Puis des études ont révélé que cette spécificité dépend de l'état de phosphorylation. Dans les échantillons déphosphorylés (échantillons traités à la phosphatase alcaline), l'anticorps anti-tau-1 colore les astrocytes, les cellules gliales périneuronales, et les axones, les corps cellulaires et les dendrites des neurones, alors qu'il ne colore que les axones dans les échantillons non traités (6). (L'épitope reconnu par l'anticorps anti-tau-1 se trouve probablement à proximité ou au niveau d'un site phosphorylé.)

Protéines associées aux microtubules bovines dénaturées et purifiées.

Concentration : Pour connaître la concentration spécifique du lot, veuillez vous référer au certificat d'analyse.

Remplace le(s) produit(s) suivant(s) : AB1512

Format : purifié

Produit purifié sur protéine A.

Tampon phosphate 0,02 M (pH 7,6), NaCl 0,25 M et 0,1 % d'azoture de sodium

À conserver à -20 °C pendant 1 an à compter de la date d'expédition. À diviser en aliquotes pour éviter les congélations et décongélations répétées. Pour récupérer le maximum de produit, centrifuger le flacon d'origine après décongélation et avant de retirer le capuchon.

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