Anti-Vinculin Antibody

Extrait brut de muscle lisse d'utérus adulte humain normal.

Domaine de recherche
Signalisation

L'anticorps anti-vinculine, clone VIIF9 (7F9), est un anticorps dirigé contre la vinculine destiné aux analyses par IP, WB, IC et IH(P).

Sous-domaine de recherche
Signalisation du cytosquelette

Western blotting : Dilution au 1/1000e ; bande de ~117 kDa. Suggestion de tampon de blocage : TBS-Tween avec 2 % de BSA. Suggestion de tampon de dilution : TBS-Tween avec 0,05 % d'azoture de sodium. Pourcentage de gel préférentiel : 10 % et/ou gel en gradient à 4-20 % (ou similaire).

Immunohistochimie sur coupes de tissu congelé et inclus en paraffine. Suggestion de fixation pour les coupes de tissu congelé : fixation à l'acétone pendant 6 minutes à température ambiante. Pour les coupes de tissu fixé au formol et inclus en paraffine : tampon citrate 0,01 M (pH 6,0) puis passage au micro-ondes pendant 8-10 minutes (remarque : tous les micro-ondes étant différents, des ajustements peuvent s'avérer nécessaires). Si besoin, poursuivre avec une digestion enzymatique (0,01 % de pronase pendant 10 minutes). Suggestion d'agent de blocage : sérum de veau fœtal. L'anticorps a également été utilisé avec succès sur du tissu fixé avec le fixateur de Carnoy méthylé.

Immunocytochimie (voir les notes d'application ci-dessous).

Immunoprécipitation. Suggestion de tampon d'extraction : Tris-HCl 20 mM à pH 7,4, NaCl 150 mM, 1 % de Triton X-100, 0,1 % de SDS, 0,5 %de NaCl-acide désoxycholique et PMSF 0,5 mM. Volume réactionnel final : 1 ml. Suggestion d'agent de capture : anticorps anti-IgG de souris conjugué à de l'agarose. Il est à noter que l'isoforme spécifique des muscles, la méta-vinculine (MW 150 kDa), co-précipite dans ces conditions.

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

NOTE D'APPLICATION POUR LA RÉFÉRENCE MAB3574

IMMUNOCYTOCHIMIE

Pour les cellules en culture, suivre la méthode suivante : 1) laver deux fois les cellules avec le tampon "A" (Pipes 100 mM [pour le dissoudre, titrer avec du KOH], MgCl2 0,5 mM, EDTA 0,1 mM, EGTA 0,01 M [pour le dissoudre, titrer avec du KOH], pH 6,9) ; 2) fixer pendant 15 min à température ambiante (3,7 % de formol, 0,2 % de Triton X-100, glycérol 2 M, préparé sur tampon "A") ; 3) laver 3 fois avec du tampon "A" ; 4) procéder à l'incubation avec les anticorps primaires, etc.

Vinculine. Localisation intracellulaire, associée au cytosquelette.

En solution dans du tampon phosphate 0,02 M contenant du NaCl 0,25 M et 0,1 % d'azoture de sodium.

Format : purifié

À conserver entre 2 et 8 °C en aliquotes non dilués jusqu'à 6 mois à compter de la date de réception.

Témoin
TÉMOIN POSITIF :

La vinculine est présente dans tous les types de cellules.

Produit testé

Concentration : Pour connaître la concentration spécifique du lot, veuillez vous référer au certificat d'analyse.

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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