Anti-Huntingtin Disease (HD/HTT) Antibody

La maladie de Huntington (MH) est une affection neurodégénérative héréditaire et progressive, caractérisée par des changements de personnalité, une déficience motrice et une démence sous-corticale. La base moléculaire de cette maladie implique l'expansion du trinucléotide CAG, codant pour une polyglutamine dans le premier exon d'un gène du chromosome quatre (4p16.3), qui produit normalement une protéine largement exprimée de 3 136 a.a. (env. 350 kDa) appelée huntingtine et dont la fonction reste à clarifier. Cette protéine se trouve dans la région périnucléaire avec les microtubules et dans la région centrosomale avec la gamma-tubuline. La protéine huntingtine est nécessaire à la survie des neurones et participe au trafic des vésicules synaptiques, à la fixation des microtubules et pourrait également jouer un rôle dans l'apoptose. Dans la MH, les cellules neuronales avec la forme mutante de la huntingtine présentent des agrégations intranucléaires du fragment N-terminal, ce qui provoque des inclusions dommageables dans les zones périnucléaires et la mort des cellules striatales. La huntingtine de type sauvage et les anti-huntingtines réduisent l'agrégation et la toxicité cellulaire de la forme mutante de la huntingtine dans les modèles cellulaires mammifères de la maladie de Huntington. La protéine huntingtine est connue pour interagir avec GAPDH, HAP-1, SP1 et TAFII130.

Supérieure à 200 kDa

Protéine de fusion entre la GST et les 256 premiers acides aminés de la protéine huntingtine humaine, avec suppression de la voie polyglutamine.

Domaine de recherche
Neurosciences

Détectez la protéine huntingtine avec cet anticorps anti-huntingtine, clone mEM48, validé pour une utilisation en IC, IH et WB.

Immunohistochimie :
des dilutions du 1/50e au 1/100e d'un précédent lot ont été utilisées avec une coloration au complexe avidine-biotine (ABC) sur du tissu fixé au paraformaldéhyde à 4 %. Il est suggéré de diluer dans un tampon PBS contenant 3 % de BSA. L'anticorps fonctionne sur les coupes de tissus incluses en paraffine.
Il est suggéré de diluer dans un tampon PBS contenant 3 % de BSA. L'anticorps fonctionne sur les coupes de tissus incluses en paraffine. Yu, Z et al (2002) Hum. Mole. Genetics 11(8):905-914. Consultez la page http://hmg.oxfordjournals.org/cgi/content/full/11/8/905 pour de bonnes méthodes d'IHC et des photos de mEM48 sur des tissus de rongeurs avec du matériel transgénique humain.

Immunocytochimie :
il est suggéré de réaliser une fixation légère au PFA à 4 % suivie d'une incubation dans du triton X-100 à 0,1 % avant de procéder au blocage.
Un précédent lot de cet anticorps a été utilisé en IC.

Western blotting :
dilutions du 1/50e au 1/500e avec la méthode ECL, en fonction du niveau de la protéine mutante. Il est suggéré de diluer dans un tampon PBS contenant 3 % de BSA ou dans un tampon PBS contenant 5 % de lait écrémé.
Les préparations de fractions nucléaires améliorent les signaux ; protéine monomère env. 80 kDa ; les agrégats sont courants et peuvent être de taille > 200 kDa.

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

Sous-domaine de recherche
Maladies neurodégénératives

Réagit avec la protéine huntingtine humaine (à la fois endogène et recombinante). MAB5374 réagit avec la protéine huntingtine mutante chez les patients et les animaux transgéniques qui expriment des nombres différents de répétitions (de 82 à 150 glutamines). Il devrait donc reconnaître différentes formes de huntingtine mutante.

IgG monoclonale de souris issue de surnageants de cultures et ne contenant aucun agent de conservation.

Produit non purifié

Stable à -20 ºC pendant 6 mois à compter de la date de réception en aliquotes non diluées.
Recommandations relatives à la manipulation du produit : Dès réception, et avant le retrait du bouchon, centrifuger le flacon et mélanger délicatement la solution. Répartir en aliquotes dans des microtubes à centrifuger et conserver ces derniers à -20 °C. Éviter les congélations/décongélations répétées, qui peuvent détériorer les IgG et nuire aux performances du produit.

Contrôle
Lysat de cortex cérébral humain normal, échantillons de cortex cérébral de souris HD ou de type sauvage

Lysats de cellules HEK293.

Produit évalué en routine par western blotting sur des lysats de cellules HEK293.

Analyse par western blotting :
une dilution au 1/1 000e de ce lot a permis de détecter la protéine huntingtine dans 10 µg de lysats de cellules HEK293.

Concentration : voir le certificat d'analyse du lot concerné.

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