Anticorps anti-VANGL2, clone 2G4

La protéine VANGL2 ("Vang-like protein 2", UniProt Q91ZD4, aussi appelée "Loop-tail-associated protein", "Loop-tail protein 1", ou "Van Gogh-like protein 2") est codée par le gène Vangl2 (aussi dénommé Lpp1, Ltap, Stb1 et Stbm) (identifiant du gène : 93840) chez les espèces murines. Les protéines VANGL1 et VANGL2 ("mammalian Van Gogh-like proteins") sont orthologues à Vangl/Strabismus, dont le gène a été identifié à l'origine comme un gène central de la polarité cellulaire planaire (PCP) chez la drosophile. VANGL1 et VANGL2 sont des protéines de la voie WNT/PCP qui constituent un régulateur essentiel de la polarité cellulaire et des mouvements directionnels, des aspects cruciaux de la morphogenèse des tissus et du développement embryonnaire. La PCP est impliquée dans la fermeture du tube neural, dans l'orientation du faisceau pileux dans les cellules sensorielles de l'oreille interne et dans l'orientation des cils motiles du nœud embryonnaire, et dans la division cellulaire asymétrique. Des mutations faux-sens de VANGL1 et VANGL2 ont été identifiées dans des embryons humains affectés par de graves anomalies du tube neural (NTD). De même, la mutation homozygote Looptail (Lp) de Vangl2 chez la souris provoque des défauts de morphogenèse et de structuration dans de nombreux tissus, le plus gros problème affectant la fermeture du tube neural (craniorachischisis). VANGL1 et VANGL2 sont toutes deux des protéines de la membrane plasmique à 4 domaines transmembranaires (a.a. 109-129, 148-168, 179-199 et 218-238 pour la protéine VANGL2 murine) comportant une extrémité N-terminale et une extrémité C-terminale cytoplasmiques (a.a. 1-108 et 239-521 pour la protéine VANGL2 murine). Elles présentent une certaine redondance, mais possèdent des profils d'expression différents dans le cerveau de la souris. Les deux protéines peuvent former des homodimères ou des hétérodimères, créant ainsi différents complexes durant le développement embryonnaire.

~60 kDa (poids observé). 59,71 kDa (homme) et 59,77 kDa (souris et rat) (poids déterminés par calcul). Des bandes non caractérisées peuvent apparaître avec certains lysats.

Fragment N-terminal de VANGL2 recombinant avec étiquette GST 100 % conservé chez l'homme, la souris et le rat.

Analyse par A : Un surnageant de culture d'hybridome produisant le clone 2G4 a permis de détecter spécifiquement la protéine de fusion constituée d'un fragment GST N-terminal et de VANGL2, mais pas VANGL1 (Belotti, E., et al. (2012). PLoS One. 7(9):e46213).

Analyse par immunofluorescence : Un lot représentatif a permis de détecter l'immunoréactivité de VANGL2 colocalisée avec celle de VANGL1 au niveau de la membrane cellulaire des faisceaux pileux stéréociliaires par coloration immunohistochimique à fluorescence de coupes de cochlées entières fixées avec 4 % de paraformaldéhyde. Une immunoréactivité drastiquement réduite de VANGL2 a été observée dans des coupes de tissus issus de souris homozygotes avec mutation Looptail (Lp/Lp) au niveau de Vangl2 (Belotti, E., et al. (2012). PLoS One. 7(9):e46213).

Analyse par immunoprécipitation : Un lot représentatif a permis d'immunoprécipiter une protéine de fusion constituée d'un fragment GST N-terminal et de VANGL2, mais pas VANGL1, ainsi que la protéine VANGL2 endogène à partir de cellules de carcinome mammaire humain SK-BR-7 non traitées, mais pas à partir de cellules de carcinome mammaire humain SK-BR-7 traitées par un shARN réduisant l'expression de VANGL2 (Belotti, E., et al. (2012). PLoS One. 7(9):e46213).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter la protéine VANGL2 endogène ainsi que la protéine VANGL2 marquée avec la protéine fluorescente jaune Venus exprimée de façon exogène dans des cellules atteintes de leucémie lymphoïde chronique (LLC) humaines MEC1 transfectées (Kaucká, M., et al. (2015). Cell Commun Signal. 13:2).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter une protéine de fusion constituée d'un fragment GST N-terminal et de VANGL2, mais pas VANGL1, ainsi que la protéine VANGL2 endogène dans du lysat de cellules de carcinome mammaire humain SK-BR-7 non traitées, mais pas dans du lysat de cellules de carcinome mammaire humain SK-BR-7 traitées par un shARN réduisant l'expression de VANGL2 (Belotti, E., et al. (2012). PLoS One. 7(9):e46213).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter une expression de VANGL2 plus forte dans du cerveau et du poumon de souris que dans du rein de souris. Une expression cochléaire plus faible de VANGL2 a été observée chez des souris présentant la mutation hétérozygote Looptail (Lp) de Vangl2 ; la baisse était encore plus prononcée chez des souris homozygotes Vangl2(Lp/Lp) (Belotti, E., et al. (2012). PLoS One. 7(9):e46213).

Domaine de recherche
Neurosciences

L'anticorps anti-VANGL2, clone 2G4 (référence MABN750), est un anticorps monoclonal de rat hautement spécifique qui cible VANGL2, et qui a été testé en ELISA, immunofluorescence, immunoprécipitation et western blotting.

Le clone 2G4 réagit spécifiquement avec VANGL2, mais pas VANGL1. Le clone 2G4 a permis de détecter la régulation à la baisse de VANGL2 médiée par shARN dans des cellules de carcinome mammaire humain SK-BR-7 (Belotti, E., et al. (2012). PLoS One. 7(9):e46213).

Format : Produit purifié

IgG2a de rat purifiée dans un tampon contenant de la Tris-glycine 0,1 M (pH 7,4), du NaCl 150 mM et 0,05 % d'azoture de sodium.

Purification sur protéine G.

Stable pendant 1 an entre 2 et 8 °C à partir de la date de réception.

Produit évalué par western blotting sur du lysat de tissu cérébral de souris.

Analyse par western blotting : Une dilution au 1/500e de cet anticorps a permis de détecter VANGL2 dans 10 µg de lysat de tissu cérébral de souris.

Concentration : Voir la fiche technique correspondant spécifiquement au lot utilisé.

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