Anti-Huntingtin Disease (HD/HTT) Antibody

La huntingtine (UniProt : P42858 ; également appelée protéine HD, ou protéine de la maladie de Huntington) est codée par le gène HTT (également connu sous le nom de HD ou IT15) (identifiant du gène : 3064) chez l'homme. Un mauvais repliement et l'auto-agrégation de certaines protéines sont des caractéristiques communes aux maladies neurodégénératives bien connues, comme la maladie de Huntington (MH), la maladie d'Alzheimer (MA), la maladie de Parkinson (MP) et la sclérose latérale amyotrophique (SLA). Une séquence répétitive ou une élongation de polyglutamine (polyQ) anormale entraîne un défaut de repliement de la protéine et une neurodégénérescence. La MH par exemple est due à une expansion de polyglutamine dans la séquence codée par le premier exon de la huntingtine causale (exon 1 de la Htt). La chaîne polyQ étendue provoque la formation d'agrégats fibrillaires riches en feuillets bêta appelés amyloïde. Huit protéines contenant des tractus polyQ autres que la Htt entraînent également un défaut de repliement protéique et une neurodégénérescence en cas d'expansion de polyQ. De plus en plus d'observations semblent indiquer que les oligomères solubles voire même les monomères de protéines amyloïdes pathologiques sont les espèces les plus toxiques. Dans la MH, la formation des espèces agrégées de très grande taille en phase finale de la Htt mutante (Httm), appelées corps d'inclusion et réparties de manière diffuse dans tout le neurone, constituerait une réponse d'adaptation servant à séquestrer les espèces toxiques de la Httm sous forme de monomère ou de petit oligomère.

Variable en fonction du nombre de polyQ. La région polyQ de la protéine huntingtine (Htt) est hautement polymorphe et peut contenir de 10 à 35 répétitions dans la population normale, pour aller jusqu'à 120 répétitions ou plus chez les patients atteints de la maladie de Huntington. Poids théorique (calculé) de 347,6 kDa d'après la séquence donnée par UniProt pour P42858.

Fragment de huntingtine (Htt) humaine avec étiquette GST en position N-terminale correspondant à la séquence codée par l'exon 1 contenant une section composée de 66 glutamines (GST-171-Q66; Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Analyse par microscopie électronique : Un lot représentatif a permis d'immunomarquer un fragment N-terminal de huntingtine (Htt) exprimé de manière transitoire contenant une expansion de polyQ à 97 répétitions dans des neurones transfectés. Le clone 3B5H10 a permis de marquer la Htt diffuse présente dans le cytoplasme tout en ne colorant que faiblement la Htt des organites et sans colorer du tout la Htt située dans les grands corps d'inclusion (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Analyse par immunocytochimie : Un lot représentatif a permis d'immunomarquer des neurones exprimant de façon transitoire la Htt ou l'ataxine-3 présentant une expansion de polyQ pathologique (Q46 à Q138), mais pas des neurones exprimant la Htt du type Q17 ou l'ataxine-3 du type Q27. Le clone 3B5H10 a permis de marquer la Htt mutante (Httm) diffuse, mais pas la Htt agrégée dans les grands corps d'inclusion (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Analyse par immunohistochimie : Un lot représentatif a permis d'immunomarquer des coupes de tissus cérébraux issus de souris transgéniques exprimant des huntingtines mutantes (Httm) humaines pathologiques, notamment les souches murines BACHD (Httm complète du type Q97), R6/2 (fragment d'exon 1 du type ~Q150), et YAC-SCA3 (Httm complète du type Q84). Le clone 3B5H10 a permis de marquer la Htt diffuse mais n'est pas parvenu à marquer les tissus contenant de la Htt fortement agrégée, à moins d'effectuer un démasquage antigénique puissant par traitement à l'acide formique à 90 % (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Analyse d'inhibition : Un lot représentatif a empêché l'agrégation d'un fragment codé par l'exon 1 de la Htt mutante (Httm) du type Q39 ou Q53 et a dégradé in vitro des fibrilles et des oligomères de Httm pré-agrégée en monomères, comme le montrent les analyses par microscopie à force atomique (AFM) et diffusion dynamique de la lumière (DLS) (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter des constructions de huntingtine (Htt), de récepteur des androgènes (AR) et d'atrophine comportant une expansion de polyQ pathologique (Q65 à Q103), mais pas de constructions du type Q19 ou Q25, exprimées par voie exogène dans des cellules HEK293 et PC12. Le clone 3B5H10 a permis de détecter des fragments N-terminaux de Httm monomère et peut-être de petits oligomères d'Httm, mais pas de gros oligomères ou d'agrégats de haut poids moléculaire (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

L'anticorps anti-protéines à polyQ pathologique, clone 3B5H10 (réf. MABN821) est un anticorps monoclonal de souris hautement spécifique qui cible les protéines à polyQ pathologique. Il a été testé en microscopie électronique, immunocytochimie, immunohistochimie, dans des études d'inhibition et en western blotting.

L'épitope ciblé par le clone 3B5H10 est exposé dans certaines des nombreuses conformations adoptées par les espèces polyQ, sous forme monomère et peut-être aussi sous forme de petit oligomère, de huntingtine mutante (Httm), mais disparaît dans les formes agrégées de plus haut poids moléculaire telles que les corps d'inclusion. L'épitope existe aussi dans les formes mutantes d'autres protéines contenant de la polyglutamine (polyQ) provoquant une neurodégénérescence, notamment le récepteur des androgènes, l'atrophine et l'ataxine-3 (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Format : purifié

Produit évalué par western blotting avec des fragments recombinants de Htt-134Q mutante et de Htt-17Q de type sauvage.

Analyse par western blotting : Une concentration de 0,5 µg/ml de cet anticorps a permis de détecter un fragment N-terminal de huntingtine codé par l'exon 1 présentant une expansion constituée de 134 glutamines/Gln (134Q), mais pas le fragment normal (de type sauvage) correspondant avec 17Q.

Concentration : Voir la fiche technique du lot concerné.