Test de détection d′ALDH AldeRed^®

Le kit de détection d'ALDH AldeRed offre aux chercheurs du cancer et des cellules souches de nouvelles capacités pour l'isolement et la caractérisation des cellules vivantes. Le réactif AldeRed est un substrat de l'aldéhyde déshydrogénase (ALDH) fluorescent et décalé vers le rouge, qui permet d'identifier et d'isoler les cellules par cytométrie en flux avec utilisation simultanée de la fluorescence verte sur des lignées de cellules, des anticorps, des animaux transgéniques et des tests avec rapporteur.

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L'activité élevée d'ALDH sert de marqueur universel des cellules souches normales et malignes. Les cellules peuvent être identifiées et isolées en fonction de l'activité enzymatique d'ALDH, une enzyme détoxifiante responsable de l'oxydation de sous-produits d'aldéhyde dangereux. Le marqueur ALDH a été utilisé pour isoler les cellules souches cancéreuses de diverses tumeurs malignes humaines, notamment au niveau de la vessie, du sein, du col de l'utérus, du côlon, de la tête et du cou, du foie, des poumons, du pancréas, de la prostate et des ovaires. Le test AldeRed utilise un substrat de l'ALDH fluorescent et non toxique (AldeRed 588-A), qui diffuse librement dans les cellules intactes et viables, mais reste piégé à l'intérieur des cellules une fois converti par l'ALDH en l'acide correspondant. La quantité de fluorescence produite est proportionnelle à l'activité de l'ALDH dans les cellules et est mesurée par cytométrie en flux, permettant ainsi le tri cellulaire activé par fluorescence (FACS). Ce kit contient du diéthylaminobenzaldéhyde (DEAB), un inhibiteur de l'ALDH utilisé pour le contrôle négatif du test, lui-même nécessaire à l'évaluation du bruit de fond de la fluorescence.

• Pour une excitation et une émission optimales d'AldeRed 588-A, utilisez une combinaison de laser bleu (488 nm) ou de laser vert (532 nm) avec un détecteur PE-rouge Texas (615 nm). La détection dans les canaux de mesure proximaux (p. ex., PE) est également possible, mais peut affecter le delta d'intensité moyenne de fluorescence (IMF) entre l'échantillon test et l'échantillon témoin traité au DEAB.
• Toutes les cellules vivantes intactes (même avec une faible expression d'ALDH) deviennent fluorescentes après exposition à l'AldeRed 588-A activé. La génération d'un témoin traité au DEAB est nécessaire pour chaque échantillon de cellules afin d'établir le niveau de référence de la fluorescence.
• Manipuler tous les réactifs à l'aide de techniques aseptiques.

Domaine de recherche
Recherche sur les cellules souches

Apoptose et cancer

• Conserver le kit entre 2 et 8 °C.
• Le réactif AldeRed reconstitué et activé peut être conservé en aliquotes à -20 °C, à l'abri de la lumière, jusqu'à 1 an maximum. Il est déconseillé de procéder à des congélations/décongélations répétées.
• Le tampon de réaction AldeRed Assay Buffer supplémenté au vérapamil peut être conservé en aliquotes entre 2 °C et 8 °C jusqu'à 3 mois maximum.

• Chaque lot est testé en mesurant l'activité ALDH dans des cellules SK-BR-3 par cytométrie en flux.
• Le réactif AldeRed^® est pur à 95 % (PMR).

1. Réactif AldeRed (réf. CS216596) : Un (1) flacon contenant 50 µg de réactif AldeRed en poudre.

2. Réactif DEAB (réf. CS216595) : Un (1) flacon contenant 1 ml de réactif DEAB (diéthylaminobenzaldéhyde).

3. Acide chlorhydrique (2N) (réf. CS216594) : Un (1) flacon contenant 1,5 ml d'acide chlorhydrique 2N.

4. Diméthylsulfoxyde (réf. CS216593) : Un (1) flacon contenant 1,5 ml de diméthylsulfoxyde (DMSO).

5. Tampon de réaction AldeRed (réf. CS216592) : Quatre (4) flacons contenant chacun 25 ml de tampon de réaction AldeRed.

6. Vérapamil (réf. CS220012) : Quatre (4) flacons contenant chacun 615 µg de vérapamil en poudre.

ALDERED is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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