Kit de détection in situ de la mort cellulaire, fluorescéine

Le Kit de détection in situ de la mort cellulaire, fluorescéine est une technique non radioactive, précise, rapide et simple pour détecter et quantifier la mort cellulaire apoptotique au niveau d'une seule cellule, par microscopie en fluorescence et détection quantitative par cytométrie en flux dans des cellules ou des tissus. De ce fait, le Kit de détection in situ de la mort cellulaire peut être utilisé dans de nombreux systèmes d'essai différents.
Par exemple :

• Détection de cellules apoptotiques individuelles dans des coupes de tissus congelées et fixées au formol en recherche fondamentale
• Détermination de la sensibilité de cellules malignes à une apoptose induite par un médicament en recherche sur le cancer
• Typage de cellules subissant une mort cellulaire dans des populations hétérogènes par des procédures de double coloration

La réaction TUNEL marque de préférence les cassures du brin d'ADN générées pendant l'apoptose. Cela permet de faire la distinction entre l'apoptose issue d'une nécrose et celle issue des cassures du brin d'ADN induites par les médicaments cytostatiques et l'irradiation.

Kit pour la détection et la quantification de l'apoptose au niveau d'une seule cellule, s'appuyant sur le marquage des cassures des brins d'ADN (technologie TUNEL), l'analyse par microscopie en fluorescence ou par cytométrie en flux.

Les méthodes largement utilisées pour déterminer l'apoptose incluent l'analyse de l'ADN génomique par électrophorèse sur gel d'agarose et les essais de fragmentation d'ADN à base de ³H-thymidine et alternativement de 5-Bromo-2'-désoxyuridine. Ces méthodes impliquent la séparation d'ADN de faible poids moléculaire fragmenté de l'ADN de poids moléculaire élevé non fragmenté dans une population de cellules donnée. De ce fait, ces méthodes ne fournissent pas d'information sur le devenir d'une cellule individuelle dans une population de cellules donnée, et en particulier, dans les coupes de tissus. Alternativement, des cellules apoptotiques individuelles peuvent être reconnues au microscope en raison de l'apparence caractéristique de la condensation et de la fragmentation de la chromatine nucléaire, mais cette méthode est subjective et limitée à un intervalle de temps relativement réduit quand les changements morphologiques sont au maximum.
Le signe distinctif de l'apoptose est la dégradation de l'ADN, qui, aux premiers stades, est sélective vis-à-vis des régions de liaison de l'ADN internucléosomal. Le clivage de l'ADN peut produire des coupures (brèches) de l'ADN double brin et de l'ADN simple brin. Les deux types de coupures peuvent être détectés par le marquage des terminaisons 3'-OH libres avec des nucléotides modifiés (par ex. biotine-dUTP, DIG-dUTP, fluorescéine-dUTP) dans une réaction enzymatique. La désoxyribonucléotidyl-transférase terminale (TdT) catalyse la polymérisation indépendante de la matrice des désoxyribonucléotides à l'extrémité 3' de l'ADN simple brin et double brin. Cette méthode est également appelée TUNEL (TdT-mediated dUTP-X Nick End Labeling). Il est également possible de marquer les groupes 3'-OH à l'aide d'ADN polymérases par le mécanisme dépendant de la matrice appelé translation de coupure (nick translation). Toutefois, la méthode TUNEL est considérée comme plus sensible et plus rapide.

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

1 kit constitué de 2 éléments.

Solution de travail : Ajouter le volume total (50 μl) de Solution enzymatique aux 450 μl restants de Solution de marquage pour obtenir 500 μl de mélange réactionnel TUNEL.
Bien mélanger pour équilibrer les composants.