Test ELISA^{PLUS de détection de mort cellulaire}

Utilisez ce kit pour la quantification relative des fragments d′ADN complexés à des histones (mono et oligonucléosomes) en-dehors du cytoplasme des cellules après induction d′une apoptose ou lors de la libération par les cellules nécrotiques. Comme l′essai ne nécessite pas de prémarquage cellulaire, il permet de détecter la dégradation internucléosomale de l′ADN génomique durant l′apoptose, même dans les cellules qui ne prolifèrent pas in vitro, par exemple les cellules tumorales fraîchement isolées. Les anticorps de cet essai ne sont pas spécifiques à une espèce particulière, le kit peut donc être utilisé pour analyser les cellules d′un large éventail d′espèces.

Produit réservé aux activités de recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Le test immuno‑enzymatique photométrique ELISA^PLUS de détection de mort cellulaire est utilisé pour la détermination quantitative in vitro des fragments d′ADN associés à des histones cytoplasmiques (mono et oligonucléosomes) après une mort cellulaire induite.
Le kit contient une solution d'arrêt qui permet aux utilisateurs d′arrêter la réaction sur le substrat et de dérouler l′essai dans des conditions définies, ce qui le rend compatible avec les applications à haut débit.

L′anticorps anti-histone réagit avec les histones H1, H2A, H2B, H3 et H4 de diverses espèces (par exemple d′homme, de souris, de rat, de hamster, de vache, d′opossum ou de Xenopus). L′anticorps anti-ADN se fixe à l′ADN simple brin et double brin. Le test ELISA permet donc de détecter les mono et les oligonucléosomes de diverses espèces, et peut servir à mesurer la mort cellulaire apoptotique dans de nombreux systèmes cellulaires différents.

Durée de l'essai : 3 - 4 heures
Contrôle négatif : En fonction des conditions de culture cellulaire, chaque culture de cellules permanentes à croissance exponentielle contient un certain nombre de cellules mortes (généralement entre 3 et 8 %). Dans l′immuno-essai, ces cellules mortes inhérentes présentes dans l′échantillon non traité (sans agent induisant la mort cellulaire) entraînent une certaine absorbance (contrôle négatif).
Contrôle positif : Un complexe ADN-histone sert de contrôle positif.
Échantillon : Fractions cytoplasmiques (lysats) de lignées cellulaires, cellules ex vivo, surnageants de culture cellulaire, et sérum ou plasma.

1 kit constitué de 10 éléments

Solution de travail : Préparation des solutions de travail

Outre les solutions prêtes à l′emploi fournies avec le kit, vous aurez besoin de préparer les solutions de travail suivantes :
Remarque : Utilisez uniquement de l′eau doublement distillée pour la reconstitution des lyophilisats.

Anticorps anti-histone-biotine
μReconstituer le lyophilisat dans 450 μl d′eau doublement distillée pendant 10 minutes puis bien homogénéiser.
Utilisation : Constituant de l′immunoréactif.
Anticorps anti-ADN peroxydase
μReconstituer le lyophilisat dans 450 μl d′eau doublement distillée pendant 10 minutes puis bien homogénéiser.
Utilisation : Constituant de l′immunoréactif.
Contrôle positif
μReconstituer le lyophilisat dans 450 μl d′eau doublement distillée pendant 10 minutes puis bien homogénéiser.
Utilisation : ELISA, étape 1.
Pastilles d′ABTS
En fonction du nombre d'échantillons analysés, dissoudre 1, 2 ou 3 pastilles du flacon 7 dans 5, 10 ou 15 ml de tampon de substrat.
Utilisation : ELISA, étape 5.
Solution d'arrêt à l′ABTS
En cas de turbidité ou de précipité, chauffer à 37 °C sous agitation jusqu′à ce que la solution devienne limpide.
Utilisation : ELISA, étape 6.
Conditions de stockage (solution de travail) : Anticorps anti-histone-biotine : 2 à 8 °C pendant 2 mois
Pastilles d′ABTS : 1 mois à l′abri de la lumière. Laisser venir entre 15 et 25 °C avant utilisation.
Solution d'arrêt à l′ABTS : Entre 2 et 8 °C jusqu′à la date de péremption indiquée sur l′étiquette.

La limite de détection exacte des cellules mortes/mourantes dans un échantillon donné dépend fortement de la cinétique de la mort cellulaire, de l′agent cytotoxique employé et de la quantité de cellules affectées au sein de la population cellulaire totale. Du fait de l′utilisation de U937/camptothécine (CAM) comme système cellulaire modèle pour la mort cellulaire, l′immuno-essai permet de détecter spécifiquement les mono et les oligonucléosomes présents dans la fraction cytoplasmique de 125 équivalents cellulaires/puits.

Conversion d′unité : 1 mU = 1 x 10-3 OD (1 mU = 0,001 OD).

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.