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Collagénase D, from Clostridium histolyticum
biological source
Clostridium histolyticum
sterility
non-sterile
form
lyophilized
collagenase activity
>0.15 U/mg lyophilizate
packaging
pkg of 100 mg (11088858001)
pkg of 2.5 g (11088882001)
pkg of 500 mg (11088866001)
manufacturer/tradename
Roche
concentration
(working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)
technique(s)
tissue processing: suitable
color
light brown
optimum pH
6.0-8.0
solubility
water: soluble
NCBI accession no.
application(s)
cell analysis
foreign activity
Clostripain 0.060 U/mg
Proteases 8 U/mg ( Azocoll)
Trypsin <0.2 U/mg (with BAEE)
storage temp.
2-8°C
Quality Level
Application
La collagénase de C. histolyticum est largement utilisée pour désagréger de nombreux types de tissus (poumon, cœur, muscle, os, tissu adipeux, foie, rein, cartilage, glande mammaire, placenta, vaisseaux sanguins, cerveau, tumeurs, cordon ombilical par exemple) et pour préparer des suspensions unicellulaires destinées à la mise en place de systèmes de culture de cellules primaires. Il est recommandé d'utiliser la collagénase D lorsque la fonctionnalité et l'intégrité des protéines de la surface cellulaire sont importantes.
La collagénase Roche issue de Clostridium a servi à la préparation de cellules de nombreux type de tissus différents, notamment des hépatocytes, des adipocytes, des îlots de Langerhans, des cellules épithéliales, des cellules musculaires, des cellules endothéliales, etc. Il convient néanmoins de déterminer empiriquement la capacité de chaque lot de l'enzyme à s'attaquer à un tissu particulier.
La collagénase Roche issue de Clostridium a servi à la préparation de cellules de nombreux type de tissus différents, notamment des hépatocytes, des adipocytes, des îlots de Langerhans, des cellules épithéliales, des cellules musculaires, des cellules endothéliales, etc. Il convient néanmoins de déterminer empiriquement la capacité de chaque lot de l'enzyme à s'attaquer à un tissu particulier.
Biochem/physiol Actions
La collagénase dégrade le collagène natif. La clostripaïne, les enzymes du type trypsine et les protéases neutres dégradent également d'autres protéines.
Features and Benefits
Sommaire
Lyophilisat non stérile
Lyophilisat non stérile
General description
La collagénase D est préparée à partir de cultures de Clostridium histolyticum par filtration, précipitation au sulfate d'ammonium, dialyse et lyophilisation.
Other Notes
La collagénase de Roche est dosée en unités Wünsch (1 μmol de produit formé par minute à +25 °C avec du substrat Wünsch).
L′activité de la collagénase est fréquemment indiquée en unités Mandl (1 μmol de leucine libérée par du collagène en 5 heures à +37 °C).
Malheureusement il n'existe aucun facteur de conversion cohérent entre les deux unités d'activité, car l'unité Mandl dépend en partie de la concentration en protéases contaminantes dans la préparation de collagénase, une variable impossible à définir. Comparativement à une préparation brute, une préparation de collagénase pure donnerait une activité spécifique en unités Mandl plus faible. Les préparations de Clostridium donnent habituellement des facteurs de conversion d′environ 1/1800 (par exemple, un lot particulier de collagénase de Clostridium contenait environ 0,15 U Wünsch/mg et 250 U Mandl/mg).
L′activité de la collagénase est fréquemment indiquée en unités Mandl (1 μmol de leucine libérée par du collagène en 5 heures à +37 °C).
Malheureusement il n'existe aucun facteur de conversion cohérent entre les deux unités d'activité, car l'unité Mandl dépend en partie de la concentration en protéases contaminantes dans la préparation de collagénase, une variable impossible à définir. Comparativement à une préparation brute, une préparation de collagénase pure donnerait une activité spécifique en unités Mandl plus faible. Les préparations de Clostridium donnent habituellement des facteurs de conversion d′environ 1/1800 (par exemple, un lot particulier de collagénase de Clostridium contenait environ 0,15 U Wünsch/mg et 250 U Mandl/mg).
Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Physical form
Lyophilisat non stérile
Preparation Note
Activateur : Ca2+
Concentration de travail : 0,5 - 2,5 mg/ml
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25°C
Roche recommande de ne reconstituer que la quantité de lyophilisat nécessaire pour une utilisation immédiate. La solution reconstituée peut être conservée jusqu'à une semaine entre -15 et -25 °C. Éviter les congélations et décongélations répétées, car l'activité diminue après reconstitution.
Inhibiteurs:
Inhibiteurs de collagénases : EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoéthanol
La collagénase n'est pas inhibée par le sérum.
Inhibiteurs de la clostripaïne : TLCK
Inhibiteurs de la trypsine : aprotinine, inhibiteur de trypsine (blanc d'œuf, soja)
Activité enzymatique :
Activité collagénase : >0,15 U/mg (selon Wünsch) (à +25 °C, substrat : 4-phényl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)
Activités d'enzymes contaminantes : activité trypsine, clostripaïne et activité protéolytique totale
La collagénase D présente une activité collagénase normale à élevée et une très faible activité trypsique (généralement < 0,2 unités/mg, substrat : BAEE).
Concentration de travail : 0,5 - 2,5 mg/ml
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25°C
Roche recommande de ne reconstituer que la quantité de lyophilisat nécessaire pour une utilisation immédiate. La solution reconstituée peut être conservée jusqu'à une semaine entre -15 et -25 °C. Éviter les congélations et décongélations répétées, car l'activité diminue après reconstitution.
Inhibiteurs:
Inhibiteurs de collagénases : EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoéthanol
La collagénase n'est pas inhibée par le sérum.
Inhibiteurs de la clostripaïne : TLCK
Inhibiteurs de la trypsine : aprotinine, inhibiteur de trypsine (blanc d'œuf, soja)
Activité enzymatique :
Activité collagénase : >0,15 U/mg (selon Wünsch) (à +25 °C, substrat : 4-phényl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)
Activités d'enzymes contaminantes : activité trypsine, clostripaïne et activité protéolytique totale
La collagénase D présente une activité collagénase normale à élevée et une très faible activité trypsique (généralement < 0,2 unités/mg, substrat : BAEE).
Conserver à l'abri de la lumière.
Reconstitution dans n'importe quelle solution saline équilibrée (HBSS par exemple).
signalword
Danger
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
target_organs
Respiratory system
Classe de stockage
11 - Combustible Solids
wgk
WGK 1
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
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