Collagénase from Clostridium histolyticum

L′enzyme collagénase de Clostridium histolyticum possède un domaine de liaison au collagène (CBD) et plusieurs domaines du type polykystose rénale (PKD). Elle comporte également un site de liaison à Ca²⁺, crucial pour sa fonctionnalité, lui permettant de se lier au calcium. La collagénase est utilisée dans la prise en charge de la maladie de Dupuytren, une maladie du tissu conjonctif.

Ce produit convient à la désagrégation des tissus tumoraux humains, des tissus rénaux murins, des tissus cérébraux et pulmonaires adultes et fœtaux humains ainsi que de nombreux autres tissus épithéliaux. Il se révèle aussi utile pour l'étude de la perfusion hépatique et rénale, la digestion du tissu pancréatique, l'isolement des cellules hépatiques non parenchymateuses murines et la préparation des hépatocytes. La collagénase a également été utilisée dans la préparation de tissus artériels pour l'étude des produits de glycation avancés. Sa capacité à libérer les hépatocytes a été testée à une concentration d'environ 1 mg/ml. Concentration recommandée pour la digestion : 0,1 à 5 mg/ml.

La collagénase issue de Clostridium histolyticum a servi à digérer :

• Des échantillons pancréatiques afin d′isoler des ilôts.
• Des échantillons d′artère pulmonaire afin d′isoler des cellules des muscles lisses vasculaires pulmonaires (PVSMC).
• Des échantillons de cartilage afin d′isoler des chondrocytes.

Ce produit à base de collagénase est un mélange d′enzymes sécrétées par C. histolyticum ; les différents produits à base de collagénase se distinguent par leurs rapports relatifs des constituants du type 10-18 présents dans les enzymes sécrétées. Leurs principaux constituants sont deux collagénases, la clostripaïne et d′une protéase neutre. L′action synergique de ces enzymes dégrade le collagène et d′autres substances intracellulaires. L′action des deux collagénases et de la protéase neutre est nécessaire pour détacher efficacement des cellules d′un tissu. La collagénase a pour substrats naturels divers types de collagènes.

La collagénase est activée à l′aide de quatre atome-grammes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(bêta-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le bêta-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline.

Ce produit est préparé à partir de collagénase de type XI (C7657) issue de Clostridium histolyticum. Il possède également des activités clostripaïne, protéase neutre non spécifique et triptyque. Les solutions sont habituellement préparées à une concentration de 1-2 mg/ml dans du tampon TESCA (TES 50 mM, chlorure de calcium 0,36 mM, pH 7,4 à 37 °C).

Une unité de digestion de collagène (UDC) libère une quantité de peptides à partir du collagène d′un tendon d′Achille de bovin équivalant, en termes de couleur avec la méthode à la ninhydrine, à 1,0 μmole de leucine en 5 heures à pH 7,4 et à 37 °C en présence d′ions calcium. Une unité d′hydrolyse de FALGPA hydrolyse 1,0 μmole de furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala par minute à 25 °C. Une unité de protéase neutre hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole de tyrosine en 5 heures à pH 7,5 et à 37 °C. Une unité de clostripaïne hydrolyse 1,0 μmole de BAEE par minute à pH 7,6 et à 25 °C en présence de DTT.

Tel qu′il est livré, le produit est stable un an à -20 °C. Aucune perte d′activité FALGPA ou protéase n′est observée au bout de 30 jours à 37 °C, 50 °C et -20 °C. Les solutions de collagénase brute sont stables lorsqu′elles sont congelées rapidement en aliquotes (à 10 mg/ml) et conservées à -20 °C. Tout cycle de congélation/décongélation supplémentaire détériore la solution. Le produit conserve 100 % de son activité pendant 7 heures lorsqu′il est placé sur de la glace.