Dispase^® II

L'enzyme proposée par Sigma a été utilisée pour mettre au point un protocole de culture ex vivo de bourgeons mammaires embryonnaires de souris. Elle a servi à traiter des fragments de cœur de rat pour l'isolement de mitochondries de cette source. Elle a également été utilisée pour l'isolement de cellules souches de pulpe dentaire par hydrolyse enzymatique. Ces cellules ont été comparées aux cellules souches de pulpe dentaire isolées par une méthode d'explantation en vue d'analyser leurs propriétés de cellules souches et de différenciation.
La dispase^® II a été utilisée pour le triage de cellules marquées par fluorescence (FACS, fluorescence-activated cell sorting). Elle a également été employée pour séparer les couches de la vésicule vitelline viscérale.
Ce produit peut être utilisé pour préparer des suspensions de cellules individuelles en vue d'un séquençage.

La Dispase^® II est une protéase neutre qui hydrolyse les liaisons peptidiques N-terminales des résidus d′acides aminés non polaires. Elle peut être utilisée pour la dissociation de nombreux types de tissus et de cellules cultivées in vitro. Cette enzyme est d′une nature très douce et n′endommage pas les membranes cellulaires. Elle peut être utilisée pour empêcher les agglomérats de cellules dans les cultures en suspension. Cette protéase clive la fibronectine et le collagène de type IV, mais pas la laminine, le collagène de type V, l′albumine sérique ou la transferrine. La Dispase^® II clive spécifiquement les liaisons entre les résidus leucine et phénylalanine. Les cations Ca²⁺, Mg²⁺, Mn²⁺, Fe²⁺, Fe³⁺ et Al³⁺ activent l′enzyme. L′EDTA, l′EGTA, Hg²⁺ et les autres métaux lourds inhibent l′activité de cette enzyme. Cette enzyme contient 1 atome-gramme de zinc par molécule-gramme d′enzyme purifiée. Si le coenzyme zinc est retiré par des agents chélateurs tels que l′EDTA ou l′EGTA, on obtient une apoenzyme inactive. Cette enzyme n′est pas inhibée par le sérum.

poudre lyophilisée contenant de l′acétate de calcium et du sucre lactique

Une solution mère à 50 U/ml peut être préparée en dissolvant la poudre dans un tampon contenant 10 mM NaAc (pH 7,5) et 5 mM CaAc. Il est recommandé de la conserver à 4 °C.

L′enzyme peut être initialement dissoute à une concentration de 10 mg/ml dans un tampon HEPES/KOH 50 mM, pH 7,4 avec 150 mM NaCl. Les dilutions ultérieures doivent être réalisées dans le milieu de culture adapté aux cellules à dissocier. La Dispase est une métalloprotéinase activée par les cations divalents, notamment Ca2⁺, Mg2⁺, Mn2⁺ et Fe2⁺.

Une unité hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole (181 μg) de tyrosine par min à pH 7,5 et à 37 °C (couleur obtenue avec le réactif de Folin-Ciocalteu), sauf indication contraire.

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.