Glucose oxydase from Aspergillus niger

Peut contenir des traces d′amylase, de maltase, de glycogénase, d′invertase, et de galactose oxydase.

Protéine déterminée par la réaction du biuret.

La glucose oxydase est largement employée dans les industries alimentaire et pharmaceutique ; c′est également un constituant essentiel des biocapteurs de glucose.

Plusieurs publications mentionnent l′utilisation de la glucose oxydase G2133 dans leurs protocoles et dans diverses applications, notamment les suivantes :
a) Développement de biocapteurs :

• Revêtements constitués de nanofilms de résine diazo sur des microsphères d′alginate : Srivastava, R. et al., Biotechnol. Bioeng., 91(1), 124-131 (2005).
• Biocapteur du glucose à base de papier : Lankelma, J. et al., Anal. Chem., 84(9), 417-4152 (2012)
• Dispositif microfluidique avec glucose oxydase immobilisée sur un hydrogel pour l′analyse de la glycémie : He, R.-Y. et al., RSC Adv., 9, 32367-32374 (2019).

b) Étude FRET à molécule unique de la formation de filaments RAD51 humains : Subramanyam, S. et al., Methods Enzymol., 600, 201-232 (2018).
c) Piles à combustible enzymatiques dotées de membranes à base de chitosane : Bahar, T., and Yazici, M.S., Electroanalysis, 32(6), 1304-1314 (2020).

La glucose oxydase catalyse l′oxydation du β-d-glucose en d-glucono-β-lactone et en peroxyde d'hydrogène, l′oxygène moléculaire jouant le rôle d′accepteur d'électrons.

Poids moléculaire 160 kDa (filtration sur gel)
pI : 4,2
Coefficient d'extinction : E^1 % = 16,7 (280 nm)

La glucose oxydase issue de Aspergillus niger est un dimère constitué de deux sous-unités égales d′un poids moléculaire de 80 kDa chacune. Chaque sous-unité contient un fragment flavine adénine dinucléotide et un atome de fer. Cette enzyme est une glycoprotéine contenant environ 16 % de sucre neutre et 2 % de sucres aminés. Elle contient également 3 résidus de cystéine et 8 sites potentiels de N-glycosylation.

La glucose oxydase est capable d′oxyder les D-aldohexoses, les monodésoxy-D-glucoses et les méthyl-D-glucoses à différentes vitesses.

Cette enzyme est active sur une large plage de pH allant de 4 à 7, son pH optimal étant de 5,5. La glucose oxydase est spécifique du β-D-glucose et présente un K_M de 33-110 mM.

Elle ne nécessite aucun activateur, mais elle est inhibée par Ag⁺, Hg²⁺, Cu²⁺, l′acétate de phénylmercure et le p-chloromercuribenzoate. Elle n′est pas inhibée par les réactifs à groupe SH non métalliques suivants : N-éthylmaléimide, iodoacétate et iodoacétamide.

La glucose oxydase peut servir au dosage enzymatique du D-glucose en solution. Comme elle oxyde le β-D-glucose en D-gluconolactate et en peroxyde d'hydrogène, la peroxydase de raifort est souvent utilisée comme enzyme de couplage pour le dosage du glucose. Même si la glucose oxydase est spécifique au β-D-glucose, elle peut également permettre de quantifier les solutions de D-glucose car le α-D-glucose subit une mutarotation en β-D-glucose au fur et à mesure de la consommation du β-D-glucose par la réaction enzymatique.

Une unité oxyde 1,0 μmole de β-D-glucose en D-gluconolactone et en H₂O₂ par minute à pH 5,1 et 35 °C, ce qui équivaut à une absorption de 22,4 μl d′O₂ par minute. Si le mélange réactionnel est saturé en oxygène, l′activité peut augmenter d′un facteur pouvant aller jusqu′à 100 %.

Poudre lyophilisée contenant des sels de tampon phosphate et du chlorure de sodium