Peroxydase from horseradish

La valeur RZ (Reinheitszahl) est le rapport d′absorbance A₄₀₃/A₂₇₅ mesuré à 0,5-1,0 mg/ml dans de l′eau désionisée. C′est une mesure de la teneur en hémine, plutôt que de l′activité enzymatique. Il est possible que des préparations présentant une valeur RZ élevée aient une faible activité enzymatique.

Des études préliminaires indiquent qu′elle contient au moins cinq isozymes.

Cette enzyme a été utilisée pour comparaison dans l′essai de la peroxydase sur des extraits de brins matures de fétuque des prés. Elle a également été employée pour mesurer la production d′H₂O₂.

La peroxydase de raifort (HRP) est isolée des racines de raifort (Armoracia rusticana). Elle est utilisée dans les applications biochimiques comme les analyses par western blots, ELISA et immunohistochimie. La peroxydase de raifort est utilisée pour amplifier un signal faible et pour faciliter la détection d′une molécule cible, par exemple une protéine. La peroxydase de raifort, produit P8250, a été utilisée pour étudier les antigènes non buccaux dans les gencives en présence d′inflammation ainsi que la toxicité de la glycoprotéine du virus Ebola.

Lorsqu′elle est incubée en présence d′un substrat, la peroxydase de raifort produit un dérivé coloré, fluorimétrique ou luminescent qui permet la quantification. La peroxydase de raifort réduit légèrement le taux d′inhibition dans un mutant cydAB.

L′HRP se combine facilement au peroxyde d′hydrogène (H₂O₂) et le complexe [HRP-H₂O₂] qui en découle peut oxyder un vaste éventail de donneurs d′hydrogène. La plage de pH optimale est de 6,0-6,5 et l′enzyme est plus stable dans la plage de pH 5,0-9,0. L′HRP peut être conjuguée à des anticorps selon diverses méthodes, notamment au glutaraldéhyde, par oxydation au periodate, par des ponts disulfures et en utilisant des agents de réticulation amino et thiol. Elle est plus stable et plus petite que la β-galactosidase et la phosphatase alcaline, et constitue une étiquette enzymatique de prédilection. Sa glycosylation permet également de réduire la liaison non spécifique. Elle est couramment utilisée pour pour le dosage du glucose et des peroxydes dans une solution. Son activité enzymatique est inhibée par l′azoture de sodium, le cyanure, la L-cystine, le dichromate, l′éthylène-thiourée, l′hydroxylamine, le sulfure, le vanadate, l′acide p-aminobenzoïque et les ions Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺ et Pb²⁺ l.

La peroxydase de raifort (HRP, de l′anglais horseradish peroxidase) est isolée des racines de raifort (Armoracia rusticana) et appartient au groupe des peroxydases de type ferroprotoporphyrine. La HRP est un polypeptide à une seule chaîne qui comporte quatre ponts disulfure. Il s′agit d′une glycoprotéine contenant 18 % de glucides. Selon l′isozyme, les glucides peuvent inclure les constituants suivants : galactose, arabinose, xylose, fucose, mannose, mannosamine et galactosamine. Le poids moléculaire de la peroxydase de raifort (env. 44 kDa) inclut la chaîne polypeptidique (33,890 Daltons), l′hémine plus Ca²⁺ (env. 700 Daltons) et les glucides (env. 9,400 Daltons). Au moins sept isozymes existent. Le point isoélectrique des isozymes de peroxydase de raifort se situe dans une plage de 3,0 à 0,9.

Pour en savoir plus sur la peroxydase, rendez-vous sur www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Une unité de pyrogallol forme 1,0 mg de purpurogalline à partir de pyrogallol en 20 sec à pH 6,0 et 20 °C.