Solution de trypsine-EDTA

La trypsine sert généralement à détacher les cellules adhérentes d'une surface de culture. La concentration en trypsine nécessaire pour dissocier les cellules de leur substrat dépend essentiellement de leur type et de l'âge de la culture.

Ce produit peut être utilisé pour préparer des suspensions de cellules individuelles en vue d'un séquençage.

La trypsine clive les peptides du côté C-terminal des résidus de lysine et d′arginine. La vitesse d′hydrolyse de cette réaction diminue si l′un ou l′autre côté du site de clivage comporte un résidu acide, et l′hydrolyse est interrompue si un résidu de proline se trouve du côté carboxyle du site de clivage. L′activité trypsine est optimale à pH 7-9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amide des dérivés synthétiques des acides aminés. L′EDTA est ajouté aux solutions de trypsine pour servir d′agent chélateur, afin de neutraliser les ions calcium et magnésium qui dissimulent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L′élimination de ces ions augmente l′activité enzymatique.

Les inhibiteurs de protéase à sérine, notamment le DFP, la TLCK, l′APMSF, l′AEBSEF et l′aprotinine, inhibent la trypsine.

Ce produit est conservé à l′état congelé entre -10 et -40 °C. Il convient d′éviter les cycles de congélation et de décongélation.

La trypsine se compose d′un polypeptide à chaîne unique de 223 résidus acides aminés, produits par l′élimination de l′hexapeptide N-terminal présent sur le trypsinogène qui est clivé au niveau de la liaison peptidique Lys-Ile. La séquence d′acides aminés est réticulée par 6 ponts disulfure. Il s′agit de la forme native de la trypsine, la bêta-trypsine. La bêta-trypsine peut être autolysée, avec un clivage au niveau du résidu Lys-Ser, pour produire de l′alpha-trypsine. La trypsine fait partie de la famille des protéases à sérine.

Ce produit contient du rouge de phénol. L′emballage est susceptible de contenir une certaine quantité de dioxyde de carbone du fait de la glace carbonique ajoutée pour l′expédition. Ce CO₂ peut passer en solution et abaisser légèrement le pH, donnant une coloration orange plutôt que rosâtre. La solution orange peut être utilisée sans problème. Il est également possible d′ajuster le pH avec de l′hydroxyde de sodium. L'incubation de cellules avec une concentration de trypsine trop élevée pendant une durée prolongée peut endommager les membranes cellulaires et tuer les cellules. Il est recommandé de solubiliser la trypsine ou de la diluer à partir d′une solution concentrée en utilisant une solution saline tamponnée dépourvue d′ions Ca²⁺ ou Mg²⁺.