Solution de trypsine-EDTA

Ce produit est typiquement utilisé pour détacher les cellules adhérentes d′une surface de culture. La concentration en trypsine nécessaire pour dissocier les cellules de leur substrat dépend essentiellement de leur type et de l′âge de la culture.

La trypsine-EDTA en solution a été utilisée :

• pour détacher des cellules de cancer colorectal humain HT29 cultivées dans du milieu RPMI 1640 additionné de 10 % de sérum de veau fœtal, lors de la détermination de la fréquence cellulaire relative dans des échantillons fortement concentrés.
• pour détacher à la trypsine les cellules d'une lignée cellulaire de rein embryonnaire humain tcA-201 transfectée de façon transitoire.
• pour détacher par voie enzymatique des fibroblastes de souris (lignée cellulaire L929) mis en culture et fixés à un support, afin d'évaluer l'effet de différents traitements modifiés pour fibres et supports non tissés en poly(L/D)lactide 96/4.
• pour dissocier des cellules de leur récipient de culture en vue d'une analyse par cytométrie en flux.

Ce produit peut être utilisé pour préparer des suspensions de cellules individuelles en vue d'un séquençage.

La trypsine clive les peptides du côté C-terminal des résidus de lysine et d′arginine. Le taux d′hydrolyse de cette réaction est plus lent si un résidu acide est présent d′un côté ou l′autre du site de clivage, et l′hydrolyse est inhibée si un résidu proline est situé du côté carboxyle du site de clivage. Le pH optimal de la trypsine se situe entre 7 et 9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amides de dérivés synthétiques d′acides aminés. L′EDTA est ajouté aux solutions de trypsine comme agent chélateur pour neutraliser les ions de calcium et de magnésium qui masquent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L′activité enzymatique est stimulée si ces ions sont éliminés.

Les inhibiteurs de sérine protéases, notamment le DFP, la TLCK, l′APMSF, l′AEBSEF et l′aprotinine, inhibent la trypsine.

Ce produit est conservé congelé entre -10 et -40 °C. Éviter de congeler-décongeler plusieurs fois.

La trypsine comprend un polypeptide monocaténaire de 223 résidus d'acides aminés obtenu par clivage de l'hexapeptide N-terminal du trypsinogène au niveau de la liaison peptidique Lys-lle. Sa séquence d'acides aminés est stabilisée par 6 ponts disulfure. Il s'agit de la forme native de la trypsine : la bêta-trypsine. La bêta-trypsine peut subir une autolyse, par clivage au niveau des résidus Lys-Ser, produisant l'alpha-trypsine. La trypsine fait partie de la famille des protéases à sérine.

Solution de trypsine (2,5 g/l de trypsine porcine et 0,2 g/l d'EDTA•4Na dans de la solution saline équilibrée de Hank additionnée de rouge de phénol, 1X, testée en culture cellulaire)

Ce produit contient du rouge de phénol. Comme il est expédié sur glace carbonique, une accumulation significative de dioxyde de carbone dans l′emballage est possible. Ce CO₂ peut pénétrer dans la solution et abaisser légèrement le pH, ce qui produit une couleur orangée au lieu de rosâtre. La solution orangée peut être utilisée telle quelle ou le pH peut être ajusté avec de l′hydroxyde de sodium. L′incubation de cellules avec une concentration trop élevée de trypsine pendant une longue période peut endommager les membranes cellulaires et tuer les cellules. Il est recommandé de mettre la trypsine en solution ou de la diluer à partir d′un stock concentré avec une solution saline tamponnée sans Ca²⁺ ou Mg²⁺.