Agents de réticulation

Liaisons homobifonctionnelles et hétérofonctionnelles

Nos lieurs homobifonctionnels et hétérofonctionnels contiennent divers groupes fonctionnels, tels que des amines primaires, des groupes sulfhydryle, des acides, des alcools et des bromures. Bon nombre de nos lieurs sont fonctionnalisés avec des groupes maléimide (réactifs avec les sulfhydryles) et des groupes succinimidyle (NHS) ou isothiocyanate (ITC) qui réagissent avec les amines. Nous proposons également une large sélection de lieurs mono-protégés (Boc, Fmoc et Cbz).

Réactifs de réticulation

Les réactifs de réticulation sont des molécules comportant au moins deux extrémités réactives qui sont « activées » pour se lier à certains groupes fonctionnels (par exemple, les amines et les groupes sulfhydryle) via une liaison covalente. L’utilité de la chimie de réticulation se concrétise dans des applications telles que :

• la détermination de la structure et/ou de la fonction des protéines
• l’immobilisation de protéines ou d’autres biomolécules
• la conjugaison générale entre biomolécules
• les conjugués anticorps-médicaments

Certains des agents de réticulation les plus courants contiennent du maléimide, des groupes réactifs sulfhydryles ou des esters succinimidyle (souvent appelés esters NHS), qui réagissent avec les amines. Notre gamme comprend tous les groupes fonctionnels, avec une grande variété de longueurs de liaisons et de solubilités. Les esters sulfosuccinimidyle permettent d’obtenir des agents de réticulation plus solubles dans l’eau, ce qui peut s’avérer utile lors de la manipulation de grandes biomolécules qui ne sont pas compatibles avec les solvants organiques. Nos agents de réticulation dotés de liaisons clivables (par exemple, des disulfures) sont optimaux pour les applications où une liaison permanente n’est pas souhaitée.

Choix des agents de réticulation

Lors du choix d’un agent de réticulation pour votre application, il est important de prendre en compte plusieurs facteurs, tels que les propriétés chimiques et physiques du réactif, les groupes fonctionnels qu’il cible pour le couplage, sa longueur, sa taille moléculaire, sa solubilité dans l’eau et sa clivabilité :

Spécificité chimique : l’un des aspects les plus fondamentaux de la conception d’un agent de réticulation réside dans le fait que le réactif soit homobifonctionnel ou hétérobifonctionnel. Les composés homobifonctionnels réagissent aux deux extrémités avec le même groupe fonctionnel cible, formant ainsi une liaison covalente entre deux molécules à l’aide du même type de liaison. Ils sont utilisés dans des réactions en une seule étape pour la polymérisation de groupes fonctionnels similaires, dans la création de liaisons intramoléculaires et dans l’évaluation des interactions protéiques. Les réactifs hétérobifonctionnels possèdent deux groupes terminaux différents, ce qui permet à chaque extrémité de réagir avec un groupe fonctionnel différent. Ils sont utilisés pour des réactions contrôlées en deux étapes afin d’éviter les réactions croisées et la polymérisation indésirables.

Groupes fonctionnels ciblés : les amines, les thiols et les groupes hydroxyles constituent les principaux groupes nucléophiles ; dans des conditions appropriées, ils réagissent directement avec les groupes réactifs électrophiles présents sur de nombreux réactifs de bioconjugaison. En revanche, les groupes fonctionnels tels que les carboxylates, les aldéhydes, les phosphates organiques et les sites d’hydrogène réactifs nécessitent des agents d’activation spécifiques ou des agents de couplage secondaires avant de pouvoir former des liaisons covalentes avec un autre groupe fonctionnel.

Longueur de l’agent de réticulation : Les dimensions ou la longueur linéaire totale de la molécule cible avant et après la conjugaison doivent être prises en compte lors du choix d’un agent de réticulation. Le bras espaceur ou pont transversal du réactif détermine principalement la longueur moléculaire du composé résultant. Cette longueur peut être déterminée à l’aide de certains logiciels de modélisation moléculaire.

Réticulants clivables vs non clivables : si les biomolécules en interaction qui ont été capturées par réticulation doivent par la suite être isolées et analysées, il est important que le bras espaceur du réticulant soit clivable. De plus, les réticulants clivables sont utilisés comme réactifs de transfert pour l’étude des protéines en interaction. Nos disulfures comptent parmi les agents de réticulation clivables les plus courants. Notre gamme propose également des esters et des sulfones clivables.

Réticulants hydrophobes vs hydrophiles : dans certaines applications, l’hydrophobicité du réactif peut constituer un avantage, en particulier lorsque l’application implique la pénétration des membranes cellulaires. Les réactifs hydrophobes dépourvus de groupes fortement polaires peuvent traverser rapidement les membranes et réticuler ou marquer des protéines cellulaires internes. En revanche, les composés hydrophobes contenant un ou plusieurs groupes sulfo-NHS chargés négativement ne pourront réagir qu’avec les protéines situées à la surface de la membrane externe des cellules en raison de leur charge négative. La possibilité de choisir entre un marquage à la surface cellulaire et un marquage intracellulaire en sélectionnant des réactifs chargés ou non chargés constitue l’un des avantages de l’utilisation d’agents de réticulation hydrophobes.