Colorants pour gels d'électrophorèse des protéines

Solutions de fixation

Après l'électrophorèse sur gel, les protéines sont généralement « fixées » dans le gel afin d'empêcher leur dispersion avant la coloration. Certains colorants pour gel contiennent des substances chimiques qui rendent inutile la fixation des gels avant la coloration.

Colorants
colorimétriques pour gels de protéines

• Le bleu brillant de Coomassie est utilisé pour colorer les protéines sur des gels de polyacrylamide grâce à des interactions électrostatiques avec les groupes amino et carboxyle des protéines.
• Le colorant ReadyBlue™ pour gels de protéines est un colorant de Coomassie colloïdal rapide et sensible destiné aux gels de polyacrylamide, fourni sous forme de solution prête à l'emploi, ce qui permet un protocole plus rapide et simplifié. ReadyBlue™ peut être visualisé par des méthodes colorimétriques ou par fluorescence IR.  Cette formulation sûre ne contient ni solvants organiques ni acide phosphorique et peut être réutilisée jusqu’à 3 fois. Une sensibilité allant jusqu’à 2 ng par bande a été démontrée avec ReadyBlue™.
• Le réactif de coloration pour gel EZBlue™ est un colorant protéique colloïdal Coomassie Brilliant Blue G-250 pratique, sensible et sûr qui améliore les résultats de l’électrophorèse des protéines tout en réduisant considérablement le temps de coloration. En tant que colorant colloïdal, il réagit uniquement avec les protéines, et non avec le gel lui-même. La coloration de fond étant réduite, les bandes protéiques peuvent être visualisées presque immédiatement sur les gels de polyacrylamide et les membranes en PVDF. Aucune étape de décoloration n’est nécessaire, bien qu’un lavage à l’eau puisse intensifier les bandes et clarifier le fond. Le réactif EZBlue™ est extrêmement sensible, permettant de détecter des quantités de protéines aussi faibles que 5 ng.
• Le kit de détection réversible des protéines est un système de détection unique conçu pour la coloration des protéines sur des membranes de nylon, de nitrocellulose et de PVDF ou sur des gels PAGE, avec une sensibilité de détection similaire à celle des colorants au Coomassie. La plupart des autres colorants produisent un fond important sur les membranes de nylon en raison de fortes interactions de charge avec la membrane. La coloration est facilement réversible à l’aide d’une solution d’EDTA, ce qui permet de réutiliser le transfert pour un Western blot ou pour une analyse de séquence d’acides aminés.
• Le colorant bleu de naphtol noir peut être utilisé pour colorer les protéines sur des gels de polyacrylamide, des gels d’agarose et des membranes de nitrocellulose. Après l’électrophorèse, il est recommandé de fixer les protéines dans le gel. Le gel est ensuite coloré avec du bleu de naphtol noir à 0,1 % dans de l’acide acétique à 7 % (v/v) pendant au moins 2 heures, puis décoloré avec une solution d’acide acétique à 7 % (v/v). La sensibilité de détection est d’environ 20 % de celle du bleu de Coomassie
• Offrant la sensibilité la plus élevée, le kit de coloration à l’argent ProteoSilver™ présente une sensibilité ≥ 0,1 ng de protéine par bande avec un temps d’incubation de 3 à 12 minutes. Ce colorant est recommandé pour les protéines à très faible abondance et est compatible avec les applications MALDI-TOF.

Colorants fluorescents pour gels de protéines

• Le colorant fluorescent pour gel de protéines EZFluor™ en une étape est un colorant prêt à l’emploi qui ne nécessite qu’une seule étape de coloration de 5 à 30 minutes, sans fixation, et permet de détecter des quantités aussi faibles qu’environ 1 à 10 ng de protéines par bande. Ce colorant est entièrement compatible avec la spectrométrie de masse et le séquençage par la méthode d’Edman.
• Le colorant fluorescent pour gel de protéines EZFluor™ UV en une étape est un colorant prêt à l’emploi conçu pour l’imagerie à l’aide d’un transilluminateur UV et d’un filtre au bromure d’éthidium, compatible avec la spectrométrie de masse.
• Le colorant pour gel de protéines SYPRO^® Ruby est un colorant fluorescent prêt à l’emploi et ultrasensible destiné à la détection de protéines séparées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE). Ce colorant, spécialement conçu pour une utilisation en PAGE 2D, s’est également révélé être un excellent choix pour les gels de PAGE 1D et de focalisation isoélectrique (IEF). Le colorant pour gel de protéines SYPRO^® Ruby offre une sensibilité comparable à celle de nombreuses techniques de coloration à l’argent. 
• SYPRO^® Orange est similaire à SYPRO^® Red, bien qu’il soit légèrement plus brillant et présente une fluorescence de fond légèrement plus élevée. Ce colorant est efficacement excité par un rayonnement UV ou un éclairage à large bande. Il ne convient pas à la coloration des protéines sur des blots ou dans des gels IEF et présente une sensibilité réduite lors de la coloration des protéines sur des gels 2D.

Réactifs de décoloration

• CoZap est utilisé pour éliminer rapidement la coloration au bleu de Coomassie. Le tampon CoZap unique en son genre est placé directement dans le bac de décoloration et absorbe tout le colorant libre présent dans la solution, ce qui évite d’avoir à changer la solution de décoloration.