Nucléases (DNases et RNases)

Endonucléases de restriction

Nucléases pour la digestion de l'ADN et de l'ARN 

Nos nucléases se distinguent par leur spécificité de clivage ainsi que par des propriétés telles que le pH optimal, ce qui permet au chercheur de choisir l'enzyme digestive la mieux adaptée à ses besoins expérimentaux.La désoxyribonucléase I provenant de sources mammifères, par exemple, donne des produits avec la terminaison 5' P1 de Penicillium citrinum - dégrade l'ADN et l'ARN simple brin, mais pas l'ADN double brin. La ribonucléase A hydrolyse tout ARN contaminant les échantillons de protéines ou les préparations d'ADN plasmidique. Nombre de ces enzymes ont d'autres utilisations en biologie moléculaire. Par exemple, la DNase I "entaille" l'ADN pour permettre l'incorporation de bases marquées. La RNase A est un outil dans l'essai de protection par la RNase qui mesure l'abondance d'ARNm spécifiques.

Désoxyribonucléase I et désoxyribonucléase II DNase Enzymes

Désoxyribonucléase I et désoxyribonucléase II DNase Enzymes.

La désoxyribonucléase I catalyse le clivage endonucléolytique de l'ADN double et simple brin pour donner des produits finaux 5'-phosphodinucléotide et 5'-phosphooligonucléotide. Le produit de l'hydrolyse est un mélange complexe de mononucléotides et d'oligonucléotides 5'-phosphates. En présence d'ions magnésium, la DNase I attaque chaque brin d'ADN indépendamment et les sites de clivage sont aléatoires. En présence de manganèse (II), la DNase I clive les deux brins d'ADN à peu près au même endroit. La plupart des protocoles utilisent l'ion magnésium avec la DNase I, mais à des fins spécifiques, le manganèse est utilisé. En outre, la désoxyribonucléase II catalyse le clivage endonucléolytique de l'ADN double et simple brin pour produire des nucléosides 3'-phosphates et des produits finaux 3'-phosphooligonucléotides. L'activité de l'enzyme se situe entre 4,0 et 6,5 pH, avec seulement 15 % environ à 6,5 pH, l'optimum se situant à 5,0 pH. La stabilité optimale de l'enzyme se situe à pH 5 - 5,5, avec une inactivation rapide à pH 8,5 à 30 °C. Nous proposons une large collection d'enzymes DNase pour répondre à une variété de types d'échantillons et d'applications. Qu'elles soient lyophilisées ou sous forme liquide, certaines de nos DNases comprennent des concentrations significativement faibles de RNase ou de protéases pour protéger votre échantillon d'une digestion indésirable.

Ribonuclease A, Ribonuclease H, et Ribonuclease T₁ RNase Enzymes

La ribonucléase A catalyse le clivage endonucléolytique de l'ARN pour produire des nucléosides 3'-phosphates et des 3'-phosphooligonucléotides se terminant par Cp ou Up. Les activateurs de la RNase A comprennent les sels de potassium et de sodium. La température optimale d'activité est de 60 °C, bien que l'enzyme soit active entre 15 et 70 °C. Le pH optimal est de 7,6, avec une plage d'activité de 6 à 10. L'activité la plus élevée est observée avec l'ARN simple brin. La RNase A est une enzyme très stable et peut résister à des températures allant jusqu'à 100 °C. À 100 °C, la RNase A est la plus stable entre pH 2,0 et 4,5. La ribonucléase H hydrolyse spécifiquement les liaisons phosphodiester de l'ARN dans les duplex ARN/ADN pour générer des produits avec des extrémités 3'-hydroxyle et 5'-phosphate. Elle ne dégrade que la composante ARN de l'hybride ADN-ARN (ARN lié par hydrogène à un brin d'ADN complémentaire).

En outre, la ribonucléase T₁ catalyse le clivage endonucléolytique en deux étapes de l'ARN pour produire des nucléosides 3'-phosphates et des 3'-phosphooligonucléotides se terminant principalement par des Gp. Dans la réaction, le clivage se produit entre le groupe 3'-phosphate d'un ribonucléotide guanidine et le 5'-hydroxyle du nucléotide adjacent. Le produit initial est un nucléoside phosphate cyclique 2':3' qui est hydrolysé en phosphate 3'-nucléoside correspondant. En solution, il résiste à la chaleur (100 °C pendant 10 minutes à pH 6) et à l'acide, mais il est instable en solution alcaline (>pH 9). Il convient de noter que la réaction catalysée par l'enzyme ne peut être arrêtée en chauffant le mélange réactionnel à 100 °C. Nous proposons une large collection d'enzymes RNase, pour répondre à la variété des types d'échantillons et des applications. Qu'elles soient lyophilisées ou sous forme liquide, certaines de nos RNases comprennent des concentrations significativement faibles de protéases pour protéger votre échantillon d'un clivage indésirable des protéines.