Comment couler plus rapidement des gels grâce au système de coulée de gel mPAGE^® Lux pour gels SDS-PAGE

Découvrez le système de coulée mPAGE^® Lux pour des gels SDS-PAGE prêts à l'emploi en 3 minutes. Des gels SDS-PAGE frais, prêts quand vous en avez besoin. Intéressé ? Demandez des informations ci-dessous.

Le moulage de gel simplifié

Comment couler un gel pour SDS-PAGE ? Le coulage de gel implique généralement de verser des gels de séparation et d'empilement dans un processus étape par étape qui prend beaucoup de temps. Les chercheurs ont traditionnellement peu d'options pour répondre à leurs besoins en matière de coulage de gel et d'électrophorèse. Notre système innovant de coulée de gel mPAGE^® Lux SDS-PAGE est conçu pour offrir la flexibilité des gels coulés à la main et la fiabilité des gels préfabriqués, sans perte de qualité, de temps ou de coût significativement plus élevé qui accompagnent les autres options. Coulez des gels en moins de trois minutes avec notre système de coulée mPAGE^® Lux. Vous pouvez dire adieu aux méthodes conventionnelles et à leurs étapes manuelles fastidieuses pour la création de gels. C'est une nouveauté.

Caractéristiques et avantages du système de coulée de gel mPAGE^® Lux

Le système de coulée de gel mPAGE^® Lux remplace votre processus de coulée de gel protéique par des méthodes plus rapides, plus simples et plus sûres, avec des résultats plus reproductibles. Le système de coulée mPAGE^® Lux permet de durcir un mini-gel en 90 secondes, contre plus de 90 minutes avec les méthodes conventionnelles. Notre processus de coulée rapide avec irradiation UV accélère le durcissement des réactifs mPAGE^® Lux Bis-Tris, tandis que la chimie du gel Bis-Tris permet des temps d'exécution plus courts par rapport aux méthodes conventionnelles. Découvrez comment réaliser des gels protéiques avec ce système de coulée dans la vidéo ci-dessous.

La photopolymérisation en une seule étape, qui utilise des commandes précises du système et nécessite moins d'étapes de préparation, réduit les risques d'erreur. Notre mPAGE^® Caster empêche les fuites et l'utilisation de gels Bis-Tris offre une qualité de bande supérieure à celle des gels Tris-Glycine coulés à la main. De plus, le kit de réactifs mPAGE^® Lux, le kit de réactifs mPAGE^® TurboMix et les gels pré-coulés mPAGE^® utilisent tous la chimie Bis-Tris et partagent les mêmes tampons de migration et colorants pour gels. Notre système de coulée mPAGE^® Lux n'utilise pas d'APS ni de TEMED et offre une option plus sûre utilisant moins de produits chimiques toxiques.

Afin d'améliorer encore la compatibilité et de répondre à vos besoins en matière de flux de travail, nous proposons désormais notre masque à clipser mPAGE®. Grâce au masque à clipser mPAGE^®, les plaques courtes, les plaques d'espacement et les peignes Bio-Rad Mini-PROTEAN^® ainsi que les plaques courtes, les plaques d'espacement et les peignes mPAGE^® Mini peuvent être utilisés lors du durcissement d'un gel à l'aide du système de durcissement, la station de durcissement mPAGE^® Lux.

Remarque : la plaque courte masquée mPAGE^® Lux n'est plus nécessaire lorsque le masque à clipser est utilisé, mais la plaque courte masquée peut toujours être utilisée.

Processus traditionnel de moulage à la main

Quelles sont les étapes du coulage de gel ?

Le moulage d'un gel SDS-PAGE comprend souvent la pesée, le prémélange des solutions de gel, le moulage et le temps d'attente pour la polymérisation. Bien qu'elles soient souvent citées comme une solution plus économique, les méthodes conventionnelles de moulage manuel des gels sont chronophages et nécessitent de nombreuses étapes pratiques, ce qui peut entraîner des formulations de gel incohérentes. La qualité des gels moulés à la main et les données qu'ils peuvent aider à générer dépendent de la cohérence de la formulation des recettes de gel protéique, afin que les précieux réactifs et le temps ne soient pas gaspillés en raison d'échecs de gel.

Le système de coulée mPAGE^® Lux offre une solution innovante pour votre processus de coulée de gel. Vous n'avez plus à choisir entre gagner du temps ou économiser des ressources. Notre nouveau système de coulée de gel permet aux chercheurs de couler facilement et rapidement leurs gels lorsqu'ils en ont besoin, à un coût bien inférieur à celui des technologies de gel préfabriqué. Améliorez l'efficacité de votre laboratoire et optimisez votre flux de travail en électrophorèse sur gel grâce au système de coulée mPAGE^® Lux.

Système de coulée mPAGE^® Lux et kits de réactifs Bis-Tris

Ajoutez le système de coulée mPAGE^® Lux à votre laboratoire et disposez de gels Western blot et de gels d'électrophorèse prêts à l'emploi en moins de 3 minutes. Respirez et habituez-vous à un processus de coulée de gel rapide, avec moins de déchets et sans crainte d'échec. C'est nouveau. Profitez de nos kits mPAGE^® Lux Casting System comprenant la station de polymérisation mPAGE^® Lux, le tube de mélange mPAGE^® Lux, le moule à gel mPAGE^®, le peigne mPAGE^® à 10 et 15 puits, la mini-plaque d'espacement mPAGE^® et les plaques courtes masquées mPAGE^® Lux à 10 et 15 puits. Voici les descriptions et configurations des kits de coulée :

 Protocole de coulée de gel SDS-PAGE mPAGE^® Lux

Toutes les solutions doivent être protégées de la lumière du soleil afin d'éviter toute polymérisation. Avant de couler les gels, amenez toutes les solutions à température ambiante.

Gel de séparation

1. Préparez la solution de gel de séparation en mélangeant la solution de séparation et le diluant. Reportez-vous au tableau ci-dessous pour connaître les volumes à mélanger. La solution de gel de séparation peut être préparée en grande quantité afin de réaliser plusieurs gels à la suite.
2. À l'aide d'une pipette propre, ajoutez la solution de résolution dans un tube de mélange noir ou un autre récipient opaque.
3. À l'aide d'une pipette propre, ajoutez le diluant dans le même tube de mélange.
4. Mélangez en retournant délicatement le récipient. Ne pas agiter au vortex.

Volumes de solution de gel de séparation

Utilisez les volumes ci-dessous pour préparer un seul gel de 1,0 mm. Pour les volumes de solution de 0,75 mm et 1,5 mm, consultez le guide d'utilisation complet disponible sur la page du produit.

Gel de stacking

La solution de superposition est prête à l'emploi dès sa sortie du flacon. Utilisez 1,5 ml de solution de superposition pour un gel de 1,0 mm. Important : ne diluez pas la solution de superposition.

Coulage du gel

1. Nettoyez les plaques de verre avec un détergent doux et rincez-les à l'eau déionisée. Essuyez-les avec de l'éthanol à 70 % avant utilisation.
2. Assemblez le mPAGE^® Gel Caster à l'aide de la plaque d'espacement mPAGE^® et de la plaque courte masquée mPAGE^® Lux pour former une cassette en verre. La plaque courte masquée doit être orientée de manière à ce que le texte se trouve sur le côté gauche de la cassette. Assurez-vous que les deux plaques de verre sont alignées au bas du cadre du moulage avant de fermer les pinces. Remarque : la plaque courte masquée mPAGE^® Lux doit être utilisée avec la station de polymérisation mPAGE®.
3. Allumez la station de polymérisation mPAGE^® Lux en appuyant sur le bouton d'alimentation. La station de polymérisation lancera un autotest. Une fois l'autotest terminé, l'écran « prêt » s'affichera.
4. Ouvrez la porte et placez le moule à gel dans la station de polymérisation, en alignant le moule derrière les butoirs.
5. À l'aide d'une pipette propre de 5 ml, ajoutez la solution de gel de séparation préparée jusqu'à la ligne de remplissage indiquée sur le cadre du moule à gel mPAGE®.
6. À l'aide d'une pipette propre de 5 ml, ajoutez lentement la solution d'empilement jusqu'au sommet de la plaque courte.
7. Insérez lentement le peigne mPAGE^® en biais pour éviter la formation de bulles d'air sous les dents. Important : le mélange de différents formats de puits peut entraîner une formation incorrecte des puits. Utilisez :
   • Peignes à 10 puits avec plaques courtes masquées mPAGE^® Lux à 10 puits
   • Peignes à 15 puits avec plaques courtes masquées mPAGE^® Lux à 15 puits
8. Essuyez les éclaboussures de solution à l'avant de la plaque courte afin d'éviter un durcissement incomplet aux endroits où il y a des éclaboussures.
9. Installez le masque à clipser sur la plaque courte et le cadre de coulée.
   • L'avant du masque doit être bien ajusté contre la plaque courte, recouvrant complètement les dents du peigne.
10. Fermez la porte de la station de polymérisation et sélectionnez l'épaisseur du gel.
11. Appuyez sur Démarrer pour lancer le durcissement du gel. Conseil : si vous coulez plusieurs gels, commencez le processus de coulée du gel avec le deuxième Gel Caster pendant que le premier gel durcit.
12. Une fois le durcissement terminé, ouvrez la porte et retirez le Gel Caster. Retirez la cassette du Gel Caster en abaissant le clip de tension pour libérer le cadre du moule. Ouvrez ensuite les côtés du cadre et faites glisser la cassette vers le haut.
13. Utilisez le gel immédiatement ou enveloppez la cassette dans une serviette en papier humide et conservez-la à plat dans un sac à fermeture zip ou un autre récipient hermétique à une température comprise entre 2 et 8 °C pendant 2 semaines maximum. Ne laissez pas les cassettes sans emballage, car le gel sècherait.

Gels mPAGE^® Lux Bis-Tris avec tampons de migration MOPS et MES

Les gels mPAGE^® Lux Bis-Tris sont conçus pour fonctionner exclusivement avec des tampons de migration MOPS ou MES. Selon le tampon de migration utilisé, il est possible d'obtenir des profils de séparation très distincts. Le tampon MOPS peut être utilisé pour affiner la séparation des protéines de grande et moyenne taille, tandis que le tampon MES permet une séparation optimale des protéines plus petites. Reportez-vous aux tableaux de migration (Figure 8) pour déterminer quel système de tampon de migration est le mieux adapté à la plage de séparation souhaitée.

Comment retirer le gel après l'électrophorèse

Retirez le gel de la cassette en verre à l'aide d'un grattoir à gel. Coupez le long des bords du gel (à droite) pour éviter de le déchirer. Les gels mPAGE^® Lux Bis-Tris doivent UNIQUEMENT être utilisés avec un tampon de migration MOPS-SDS ou MES-SDS. Les gels Bis-Tris ne sont PAS compatibles avec le tampon de migration Tris-Glycine.

Coulée de gel durable avec le système de coulée de gel mPAGE^® Lux

Afin de quantifier les impacts durables de notre système de coulée mPAGE^® Lux, des calculs ont été effectués par rapport à l'utilisation d'un kit de coulée rapide représentatif pour la coulée manuelle de gels de polyacrylamide pour l'électrophorèse des protéines. Les deux systèmes nécessitent l'utilisation de kits de coulée réutilisables et de kits de réactifs pour la coulée manuelle. Le système de coulée mPAGE^® Lux nécessite en outre l'utilisation de la station de polymérisation mPAGE^® Lux Gel Curing Station, tandis que le système de référence nécessite l'utilisation d'APS et de TEMED, qui sont vendus séparément du kit de réactifs pour la coulée manuelle.

Tous les composants nécessaires au moulage des gels d'électrophorèse pendant la durée de vie minimale de la station de polymérisation mPAGE^® Lux, qui est de 5 ans, sont pris en compte dans cette évaluation. Cela inclut les impacts liés à la production, à l'emballage, à la distribution, à l'utilisation et à la fin de vie du kit de moulage manuel, des réactifs nécessaires et de tous les consommables de laboratoire requis. Les calculs ont été effectués en supposant une production de 250, 500 ou 1 000 gels par an et la différence minimale par rapport au système de référence a été revendiquée.

Caractéristiques de durabilité des matériaux et des produits

Bien qu'il s'agisse d'une solution innovante pour le moulage manuel de gels de polyacrylamide, le système de moulage mPAGE^® Lux nécessite encore l'utilisation de consommables en plastique et de réactifs dangereux. Bien qu'il n'existe aucun substitut approprié à l'acrylamide dans cette application, tous les autres risques chimiques ont été éliminés de ce système et la quantité de consommables en plastique nécessaires est considérablement réduite par rapport au système de référence.

La masse supplémentaire de la station de polymérisation des gels requise par le système de coulée mPAGE^® Lux est compensée par la réduction des produits nécessaires dans le flux de travail de coulée des gels, comme le montre le graphique. Tout au long de la durée de vie de l'instrument, la masse totale du système est réduite d'au moins 20 % par rapport aux systèmes de coulée rapide.

Masse totale du système (kg) pour la coulée de 500 gels/an :

De plus, ce produit respecte les principes de SMASH Packaging, notre stratégie qui vise à améliorer la durabilité des emballages en réduisant leur quantité, en utilisant des matériaux plus durables et en facilitant leur recyclage.

• Les emballages des produits et des articles supplémentaires nécessaires à une unité fonctionnelle sont réduits de 30 % par rapport au système de référence.
• 100 % des emballages à base de fibres du système sont certifiés issus de forêts durables.
• Tous les inserts de protection en mousse sont fabriqués à partir de polyéthylène 100 % recyclé.
• Les emballages ne contiennent aucun matériau susceptible d'entraver le recyclage, conformément à nos directives SMASH.

Distribution et utilisation du système de moulage mPAGE^® Lux

La réduction des consommables nécessaires et l'élimination de certains réactifs entraînent une diminution significative des impacts liés au transport. La réduction de masse des composants régulièrement expédiés et des emballages associés est d'au moins 24 % sur la durée de vie minimale de l'instrument.

Bien que l'instrument ajouté nécessite de l'énergie pendant son fonctionnement, la station de coulée mPAGE^® Lux a été conçue dans un souci d'efficacité énergétique. Grâce à l'utilisation d'un éclairage LED et d'une interface utilisateur simple et intuitive, la consommation d'énergie globale reste remarquablement faible. La consommation d'énergie cumulée nécessaire pour durcir 1 000 gels n'est que de 1,65 kWh, ce qui équivaut à environ 33 heures d'utilisation d'un ordinateur portable. La quantité de déchets plastiques à usage unique générés tout au long du processus de coulée des gels est réduite d'au moins 25 %. De plus, les réactifs mPAGE^® Lux se polymérisent spontanément lorsqu'ils sont exposés à la lumière ambiante, éliminant ainsi les résidus d'acrylamide non polymérisés dans les flux de déchets.

En coulant des gels frais et prêts à l'emploi selon les besoins, le risque de préparer à l'avance des gels qui ne seront pas utilisés est éliminé. Le système mPAGE^® Lux élimine la nécessité de stocker des kits de réactifs ou des gels pré-coulés à différents pourcentages, ce qui réduit la quantité de déchets générés en raison de l'expiration des composants. La station de polymérisation mPAGE^® Lux est un équipement électronique et, à ce titre, doit être éliminée conformément à toutes les réglementations applicables. Pour plus d'informations sur l'élimination des déchets électroniques, consultez notre page Conformité DEEE.

Ce produit a démontré des améliorations significatives par rapport au système de référence tout au long de son cycle de vie et a été désigné comme un produit alternatif plus écologique. Pour plus d'informations, consultez notre page sur notre cadre de conception durable et nos produits alternatifs plus écologiques.

Visualisation rapide de la détection des protéines dans le gel sans coloration à l'aide du système mPAGE^® Lux

La SDS-PAGE est une technique couramment utilisée pour séparer les protéines et autres biomolécules en fonction de leur taille. Les protéines présentes dans le gel peuvent être détectées à l'aide de colorants colorimétriques ou fluorescents bien établis, tels que le bleu brillant de Coomassie (CBB), la coloration à l'argent et le SYPRO™ Ruby. Ces méthodes de coloration varient en termes de sensibilité et nécessitent souvent plusieurs étapes d'incubation fastidieuses.

D'abord décrit comme un extincteur de fluorescence, le trichloroéthanol (TCE) est un composé qui déplace la fluorescence du tryptophane de son émission native (~350 nm) vers la lumière visible (~512 nm) en produisant un nouveau fluorophore lors de son activation par la lumière UV.^1-3 Cette propriété du TCE et d'autres composés trichloro a été exploitée par Kazmin et al. pour mettre au point une solution de coloration rapide et sensible en une seule étape.⁴ Plus tard, le TCE a été incorporé directement dans les gels SDS-PAGE pendant la préparation du gel, ce qui a permis de détecter les protéines sans étapes de coloration fastidieuses.^5,6 Nous décrivons ici la préparation de gels mPAGE^® Lux avec du TCE pour permettre la détection des protéines dans le gel sans coloration.

Comparaison entre la méthode de coloration et la méthode sans coloration

Une comparaison entre la visualisation au TCE et les méthodes de coloration au gel Coomassie a été effectuée. La sensibilité de détection était similaire entre les deux méthodes (figure 10). Cependant, la détection à base de TCE ne nécessite pas d'étape de coloration, ce qui permet de gagner au moins deux à plusieurs heures de temps de préparation, selon votre méthode de coloration actuelle.

Compatibilité de la méthode

La compatibilité de cette méthode avec l'analyse en aval, dans ce cas le Western blot, a également été testée. La figure 11 montre une comparaison entre un Western blot préparé avec et sans TCE. Une sensibilité d'immunodétection similaire a été observée lorsque les gels Western blot ont été activés pendant 45 secondes et imagés avant le transfert, comme illustré ici.

Cependant, en raison de la nature de la polymérisation du gel mPAGE^® Lux, des temps d'activation et d'exposition plus longs peuvent altérer l'efficacité du transfert des protéines. Le transfert des protéines peut devoir être optimisé. Si le Western blot doit être effectué après la visualisation au TCE, il est recommandé d'utiliser le temps d'activation le plus court possible, car l'activation peut affecter l'efficacité du transfert des gels mPAGE^® Lux.

Technologie sans coloration avec activation au TCE

Comme cette méthode d'activation TCE ne nécessite pas d'étape de coloration supplémentaire, elle permet de gagner du temps et peut être réalisée immédiatement après l'électrophorèse. Les résultats montrent également que la sensibilité de la détection des protéines est similaire à celle des autres méthodes conventionnelles qui utilisent la coloration.

Dans l'ensemble, l'utilisation des gels mPAGE^® Lux et d'autres produits d'électrophorèse mPAGE^® vous permet de préparer et d'exécuter des gels rapidement et de manière reproductible. De plus, les gels mPAGE^® Lux sont compatibles avec la technologie sans coloration décrite ici utilisant le TCE, ce qui réduit encore davantage les étapes de vos protocoles actuels. Cela offre aux chercheurs un outil précieux leur permettant de continuer à compter sur la facilité et la flexibilité de la technologie de coulée mPAGE^® Lux, tout en bénéficiant désormais de l'avantage supplémentaire d'une visualisation rapide des protéines.

Commandez le système de moulage mPAGE^® Lux et les réactifs associés