バイオバーデン試験

 バイオバーデン試験の基礎

バイオバーデン試験（微生物試験）とは、初期製造から最終流通に至るまでの生産の各段階において、製品中の微生物汚染を検出・定量化する品質管理プロセスです。消費者へのリスクを最小限に抑えるためには、効果的な品質管理と正確な試験結果が不可欠であり、これらは規制対象となる生産環境において必須とされています。そのため、製造される各ロットの安全性、品質、および規制順守を確保するために、バイオバーデン分析は日常的な試験に組み込まれることが多くあります。

バイオバーデン試験は、医療機器、医薬品、食品・飲料、水、包装材、原材料、ヒト組織、動物組織、および化粧品に対して実施されます。以下に説明する標準的な方法に従う場合、試験方法によって試験サンプルに細菌が混入したり、試験サンプル中の細菌が死滅したりしないようにすることが重要です。

• バイオバーデン試験における膜ろ過法
• バイオバーデン試験における直接培地接種法
• バイオバーデン試験における最尤数（MPN）法

バイオバーデン試験のための膜ろ過法 

抗菌物質を含む製品には、膜ろ過法が最適な手法です。この方法では、試料を孔径0.45 µmの膜フィルターに通します。膜はバリアとして機能し、膜の孔径よりも大きな微生物を捕捉します。ろ過の際、プロセスを迅速化するために真空を使用することができます。 その後、膜を培地に移し、細菌の検出には30～35 °C、真菌の検出には20～25 °Cのインキュベーター内で少なくとも5日間培養します。得られた培養物をさらに計数し、試料中の微生物汚染レベルを判定します。偽陽性結果につながる可能性のある交差汚染を防ぐため、適切な措置を講じる必要があります。

バイオバーデン試験における直接塗布法

バイオバーデン試験における直接播種法には、注ぎ込み法と塗布法がある。注ぎ込み法は、理論上の精度が高いため推奨される。注ぎ込み法では、試験サンプルが入ったペトリ皿に滅菌済みの培地を注ぎ込み、固化させる。一方、塗布法では、滅菌済みで固化した培地が入ったペトリ皿にサンプルを添加する。 いずれの方法においても、検体を培養系に添加した後、ペトリ皿を培養し、得られた菌数を計数する。

バイオバーデン試験における最尤数（MPN）法

最尤数（MPN）法は、試料中の細菌濃度のおおよその値を測定するために用いられる定量法である。原液または試料を桁数（多くの場合10倍または2倍）ごとに培養液に分注し、微生物の有無を評価する。MPN法の欠点は、信頼区間を狭めるために、適切な希釈倍率で多数の反復試験が必要となる点である。 さらに、この方法は細菌の検査にのみ有効であり、真菌の定数については信頼性の高い結果を得ることができません。