(ELISA) 酵素免疫測定法
通常、マルチウェルマイクロタイタープレートを用いて行われるELISAは、ペプチド、タンパク質、抗体など、さまざまな分子の検出および定量に広く用いられている分子生物学的なアッセイ法です。このアッセイ法では、対象となる分子をpg/mLレベルで検出することが可能であり、基礎研究および疾患研究の両方のニーズにおいて極めて重要な役割を果たしています。
ELISAアッセイ:抗体と抗原の相互作用
ELISAの基本的な分子構成要素には、通常、酵素標識された抗体、固定化された対象分子、および検出基質が含まれます。ELISAから得られるデータの成功と品質を決定づける重要な要素は、抗体-抗原相互作用の親和性と特異性に依存しています。抗原-抗体相互作用は、pH、温度、イオン強度など、数多くの要因の影響を受けます。
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ELISAの検出方式
直接検出法を用いるELISAでは、アッセイプレートの表面に直接、あるいはキャプチャー抗体を介して間接的に結合させた固定化抗原が必要であり、続いて酵素標識された抗原特異的一次抗体、および検出基質が用いられます。
より一般的に用いられる間接検出法では、非標識の一次抗体に続き、その一次抗体の検出に特異的な酵素標識二次抗体が使用されます。間接検出法では、酵素標識部分が二次抗体のみに存在するため、標的抗原との免疫反応性が高まるという利点があります。
直接法および間接法に加え、キャプチャー法(または「サンドイッチ法」)では、まずマイクロプレート表面に抗原捕捉用抗体を固定し、その後、前述の間接法と同様に、一次抗体と酵素標識二次抗体の両方を用います。
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