Rac1/cdc42活性化磁気ビーズプルダウンアッセイ

Rac1/Cdc42活性化磁気ビーズプルダウンアッセイ（カタログ番号：17-10394）は、細胞ライセート中のRacおよびCdc42活性を検出する効率の良い方法です。 このアッセイでは、Rac/Cdc42の下流エフェクターであるp21活性化タンパク質キナーゼ（PAK1）を用いて、サンプルから活性GTP結合型のRac/Cdc42を分離します。 PAK1のp21結合ドメイン（PBD）はGST融合タンパク質として発現され、磁気ビーズに結合します。 磁気ラック分離後、イムノブロットを行い、活性化Rac/Cdc42を、特異的なモノクローナル抗体と、HRP標識二次抗体およびECL試薬で検出します。

研究のカテゴリー
細胞シグナル伝達

シグナル伝達

動物種の交差反応性： ヒトおよびマウスすべての哺乳類種と交差反応すると予想されています。
抗Rac1、クローン23A8：動物種の交差反応性：ヒト、マウス、ラット他の動物種の交差反応性は不明です。
抗cdc42 動物種の交差反応性： ヒト、マウス、ラット、イヌ 他の動物種の交差反応性は不明です。

－20℃で出荷日から1年間。

GTPγSを負荷した3T3/A31およびHeLa細胞ライセートからRac1-GTPおよびcdc42-GTPを沈降させることにより定期的に評価済み（ライセートにin vitroでcdc42-GTPのためにGTPγSを負荷）。 沈殿したRac1-GTPおよびcdc42-GTPは、抗Rac抗体（1 μg/mL）を用いたイムノブロッティングにより検出しました。

Rac1/Cdc42アッセイ試薬（Pak-1 PBD、磁気ビーズ）：150 uLのグルタチオン磁気ビーズ中の300 ugのPak-1 PBD、50%グリセロールを含むPBS中の50%ビーズスラリーとして提供、最終容量300 uL。

抗Rac1、クローン23A8：250 uLの保存バッファー（0.1 Mトリス-グリシン、pH 7.4、0.15 M NaCl、0.05%アジ化ナトリウムを含む）中に250 ugの精製IgG2akappaを含むバイアル1本。

抗cdc42、マウスモノクローナルIgG1：200 uLの10 mMリン酸ナトリウム、pH 7.5、75 mM NaCl、0.75 mMアジ化ナトリウム、0.5 mg/mL BSAおよび50%グリセロール中に50 ugの精製マウスIgG1を含むバイアル1本。

Mg2+溶解／洗浄バッファー、5X、カタログ番号20-168：それぞれ18 mLの5X MLBを含むバイアル2本：125 mM HEPES、pH 7.5、750 mM NaCl、5% Igepal CA-630、50 mM MgCl₂、5 mM EDTA、10%グリセロール。

100X GTPγS、10mM、カタログ番号20-176：5.0 mM Tris-HCl、pH 7.8、加水分解されないGTPアナログ中に、50 μLの10 mM GTPγS、100Xストックを含むバイアル1本。 5 mLの細胞ライセートを十分に標識できます。

100X GDP、100 mM、カタログ番号20-177：50 mM Tris-HCl、pH 7.8中に50 μLの100 mM GDP、100Xストックを含むバイアル1本。 不活性型Gタンパク質のin vitro標識のためのGDP（グアノシン5′-二リン酸）。 5 mLの細胞ライセートを十分に標識できます。

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