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この商品について
western blot
western blot: suitable
製品名
ChIPAb+トリメチルヒストンH3(Lys4)-ChIPバリデーション抗体およびプライマーセット、ウサギモノクローナル, from rabbit
biological source
rabbit
clone
monoclonal
species reactivity
mouse, human
species reactivity (predicted by homology)
mammals
manufacturer/tradename
ChIPAb+
Upstate®
technique(s)
ChIP: suitable (ChIP-seq)
western blot: suitable
isotype
IgG
NCBI accession no.
UniProt accession no.
shipped in
dry ice
Quality Level
Gene Information
human ... H3F3B(3021)
Application
エピジェネティックスおよび核機能
クロマチン生物学
未処理またはUV処理済み(50ジュール/m2で6時間)のU2OS細胞(IPあたり3 X 106細胞相当)から調製された超音波分解クロマチンを、3 μLのウサギ抗トリメチルヒストンH3(Lys4)およびMagna ChIP A(カタログ番号17-610)キットを使用してクロマチン免疫沈降しました。Sp1結合部位を持つヒトp21プロモーターに隣接するChIPプライマーp21を用いたqPCRで、トリメチルヒストンH3(Lys4)関連DNA断片の免疫沈降が検証されています(図を参照)。
Fold Increaseは、各クロマチンサンプルのインプットによって得られる標準曲線から抽出された正規化平均IP量の割合です。このプロモーターが関与するトリメチルヒストン(Lys4)免疫沈降活性は、他の研究によって示されている通りUV処理によって増加します。
実験の詳細については、EZ-Magna A ChIP(カタログ番号17-408)またはEZ-ChIP(カタログ番号17-371)プロトコルをご覧ください。
ChIP-seq分析:
クロマチン免疫沈降は、Magna ChIP HiSensキット(17-10460)、3 µL抗トリメチルヒストンH3(Lys4)抗体(カタログ番号17-614)または20 µLプロテインA/Gビーズ、および1e6架橋結合HeLa細胞クロマチンを使用し、さらに磁気ビーズを用いてDNA精製することにより実施されています。Illuminaバーコード付きアダプターを用いた標準プロトコルによってInputおよびChIP DNAサンプルからライブラリを準備し、Illumina HiSeq装置で分析を行いました。FastQファイルから得られた1800万に及ぶ膨大な数の読取り値を、Bowtie(http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml)およびTagDust(http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/)タグ除去の順に使用してマッピングしました。MACS(http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/)を用いてピークを特定し、UCSCゲノムブラウザ(http://genome.ucsc.edu)のカスタムトラックとしてBigWigおよびBEDファイルからピークと読取り値を可視化しました。17~614および07~473データセットで特定されたピークの上位25%が、HeLa S3のENCODE H3K4me3 BROADヒストントラックで特定されたピークと99%の重複を示しました。
ウェスタンブロッティングおよびペプチド阻害:
代表的なブロットです。HeLa酸抽出物を電気泳動によって分解し、ニトロセルロースに転送し、さらに抗トリメチルヒストンH3(Lys4)(1:2,000、レーン1)により精査するか、またはモノメチル-リジン4(レーン2)、ジメチルリジン4(レーン3)、トリメチル-リジン4(レーン4)で修飾した0.4 μMヒストンH3ペプチドで前培養しました。
HRPと結合したヤギ抗ウサギ二次抗体と化学発光検出
システムを使用して、タンパク質を可視化しました(図を参照)。
Analysis Note
未処理HeLa細胞(1 X 106細胞相当)から調製された超音波分解クロマチンを、3 μLの正常ウサギIgGまたは3 μLの抗トリメチルヒストンH3(Lys4)モノクローナルIgGのいずれか、およびMagna ChIP A(部品番号17-610)キットを使用してクロマチン免疫沈降しました。
トリメチルヒストンH3(Lys4)関連DNA断片が正常に免疫沈降することを、ヒトGAPDHプロモーターに隣接するコントロールChIPプライマーを用いたqPCRによって検証しました(図を参照)。実験の詳細については、EZ-Magna A ChIPプロトコルを参照してください。
ネガティブコントロール抗体精製ウサギIgGおよびヒトGAPDHプロモーターに特異的なコントロールプライマーを含む。
Biochem/physiol Actions
Disclaimer
General description
ChIPAb+トリメチルヒストンH3(Lys4)セットには、抗トリメチルヒストンH3(Lys4)抗体、ネガティブコントロール抗体(正常ウサギ血清)、およびヒトGAPDH遺伝子のプロモーター内で166塩基対領域を増幅するqPCRプライマーが含まれています。 トリメチルヒストンH3(Lys4)とネガティブコントロール抗体は拡張性のある「ChIPごと」の反応サイズで供給され、トリメチルヒストンH3(Lys4)関連クロマチンの沈降を機能的にバリデーションするために使用できます。
Immunogen
Other Notes
ネガティブChIPコントロールウサギIgG、1バイアル
ChIPプライマーGAPDH、1バイアル
Packaging
Physical form
正常ウサギIgG。75 μLの正常ウサギIgGを含む1バイアル。
コントロールプライマー。ヒトGAPDHに特異的な5 μMの各プライマーを75 μL含む1バイアル。
FOR:TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV:TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA
Preparation Note
Legal Information
保管分類
10 - Combustible liquids
試験成績書(COA)
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書(COA) を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
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グローバルトレードアイテム番号
| カタログ番号 | GTIN |
|---|---|
| 17-614 | 04053252338830 |
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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