CSA001
Rho関連キナーゼ（ROCK）活性アッセイ
This Rho-associated Protein Kinase (ROCK) Activity Assay Kit is an enzyme immunoassay for detection of the active ROCK & DMPK family kinases.
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この商品について
UNSPSC Code:
12161503
NACRES:
NA.32
eCl@ss:
32161000
species reactivity (predicted by homology)
all
manufacturer/tradename
Chemicon®
technique(s)
activity assay: suitable
detection method
colorimetric
shipped in
ambient
General description
はじめに：
Rhoファミリーの低分子量GTPアーゼタンパク質は、細胞運動、細胞増殖、アポトーシスなどのいくつかの細胞挙動の重要な調節因子です。それらは、軸索伸長から食作用およびがん細胞浸潤まで、アクチン細胞骨格および／または微小管ネットワークを含む多くの運動応答において中心的役割を果たしています。さらに、細胞周期の進行や分化細胞応答につながる遺伝子発現の変化にも関与しています。Rhoはリゾホスファチジン酸（LPA）などの細胞外シグナルによって活性化されます。Rhoの作用は下流のRhoエフェクターによって媒介されます。そうしたエフェクターの1つがRho関連プロテインキナーゼ（ROCK）です。以下の2つのROCKアイソフォームが同定されています：ROCK-I（別名：ROKβ）およびROCK-II（別名：RhoキナーゼおよびROKα）ROCKはRhoシグナル伝達を媒介し、アクチンフィラメントの集合と収縮性に寄与するいくつかの基質のリン酸化を介してアクチン細胞骨格を再編成しています。
ROCKは、トレオニン残基696におけるミオシンホスファターゼ標的サブユニット1（MYPT1）の特異的リン酸化を介してミオシンホスファターゼを不活性化します。これにより、20 kDaのリン酸化型ミオシン軽鎖（MLC20）が増加します。このトレオニン残基は、筋強直性ジストロフィープロテインキナーゼ（DMPK）ファミリーキナーゼによってもリン酸化される可能性があります。
検査法の原理：
MilliporeのRho関連プロテインキナーゼ（ROCK）活性アッセイキットは、活性型ROCKおよびDMPKファミリーキナーゼを検出するための酵素イムノアッセイです。プレートには、ROCK-I、ROCK-II、DMPKの添加によりリン酸化される可能性のあるThr696残基を含むリコンビナントMYPT1がプレコーティングされています。次に、Thr696においてリン酸化されたMYPT1のみを特異的に検出する検出抗体を添加します。続いて、HRP標識二次検出抗体を添加します。 リン酸化された基質の量は、発色基質であるテトラメチルベンジジン（TMB）を添加して測定します。HRPと結合したTMBは、無色溶液から青色溶液（または停止溶液添加後は黄色）に変化します。450 nmでの吸収シグナルは、サンプル中のROCK活性の相対量を反映しています。
本ROCKアッセイキットは、精製されたROCK活性の存在および相対量を測定すること、ならびにROCKまたはDMPKファミリーキナーゼの阻害因子または活性化因子をスクリーニングすることを目的として設計されています。
Rhoファミリーの低分子量GTPアーゼタンパク質は、細胞運動、細胞増殖、アポトーシスなどのいくつかの細胞挙動の重要な調節因子です。それらは、軸索伸長から食作用およびがん細胞浸潤まで、アクチン細胞骨格および／または微小管ネットワークを含む多くの運動応答において中心的役割を果たしています。さらに、細胞周期の進行や分化細胞応答につながる遺伝子発現の変化にも関与しています。Rhoはリゾホスファチジン酸（LPA）などの細胞外シグナルによって活性化されます。Rhoの作用は下流のRhoエフェクターによって媒介されます。そうしたエフェクターの1つがRho関連プロテインキナーゼ（ROCK）です。以下の2つのROCKアイソフォームが同定されています：ROCK-I（別名：ROKβ）およびROCK-II（別名：RhoキナーゼおよびROKα）ROCKはRhoシグナル伝達を媒介し、アクチンフィラメントの集合と収縮性に寄与するいくつかの基質のリン酸化を介してアクチン細胞骨格を再編成しています。
ROCKは、トレオニン残基696におけるミオシンホスファターゼ標的サブユニット1（MYPT1）の特異的リン酸化を介してミオシンホスファターゼを不活性化します。これにより、20 kDaのリン酸化型ミオシン軽鎖（MLC20）が増加します。このトレオニン残基は、筋強直性ジストロフィープロテインキナーゼ（DMPK）ファミリーキナーゼによってもリン酸化される可能性があります。
検査法の原理：
MilliporeのRho関連プロテインキナーゼ（ROCK）活性アッセイキットは、活性型ROCKおよびDMPKファミリーキナーゼを検出するための酵素イムノアッセイです。プレートには、ROCK-I、ROCK-II、DMPKの添加によりリン酸化される可能性のあるThr696残基を含むリコンビナントMYPT1がプレコーティングされています。次に、Thr696においてリン酸化されたMYPT1のみを特異的に検出する検出抗体を添加します。続いて、HRP標識二次検出抗体を添加します。 リン酸化された基質の量は、発色基質であるテトラメチルベンジジン（TMB）を添加して測定します。HRPと結合したTMBは、無色溶液から青色溶液（または停止溶液添加後は黄色）に変化します。450 nmでの吸収シグナルは、サンプル中のROCK活性の相対量を反映しています。
本ROCKアッセイキットは、精製されたROCK活性の存在および相対量を測定すること、ならびにROCKまたはDMPKファミリーキナーゼの阻害因子または活性化因子をスクリーニングすることを目的として設計されています。
Application
MilliporeのRho関連プロテインキナーゼ（ROCK）活性アッセイキットは、活性型ROCKおよびDMPKファミリーキナーゼを検出するための酵素イムノアッセイです。プレートには、ROCK-I、ROCK-II、DMPKの添加によりリン酸化される可能性のあるThr696残基を含むリコンビナントMYPT1がプレコーティングされています。次に、Thr696においてリン酸化されたMYPT1のみを特異的に検出する検出抗体を添加します。続いて、HRP標識二次検出抗体を添加します。 リン酸化された基質の量は、発色基質であるテトラメチルベンジジン（TMB）を添加して測定します。HRPと結合したTMBは、無色溶液から青色溶液（または停止溶液添加後は黄色）に変化します。450 nmでの吸収シグナルは、サンプル中のROCK活性の相対量を反映しています。
本ROCKアッセイキットは、精製されたROCK活性の存在および相対量を測定すること、ならびにROCKまたはDMPKファミリーキナーゼの阻害因子または活性化因子をスクリーニングすることを目的として設計されています。また、ROCKまたはDMPKファミリーキナーゼに対する薬剤の力価の評価にも使用できます。
本ROCKアッセイキットは、精製されたROCK活性の存在および相対量を測定すること、ならびにROCKまたはDMPKファミリーキナーゼの阻害因子または活性化因子をスクリーニングすることを目的として設計されています。また、ROCKまたはDMPKファミリーキナーゼに対する薬剤の力価の評価にも使用できます。
Preparation Note
キットはラベルおよび取扱説明書に規定される温度で保存し、受領日から4か月以内に使用してください。
Other Notes
MYPT1プレコーティング96ウェルMultistripプレート：MYPT1によりコーティング済みの96ウェルmultistripプレート1枚
抗ホスホMYPT1（Thr696）抗体：抗ホスホ-MYPT1（Thr696）抗体10 µgを含有するバイアル1本
TMB/E基質：12 mL入り1ボトル
停止溶液：12 mL入り1ボトル
TBS、20倍濃縮：50 mL 20倍濃縮TBS入り1ボトル
20% Tween® 20 (v/v)：3 mL入り1ボトル
プレートシーラー：プレートカバー2個
アッセイ用希釈バッファーI：1 mL入り1ボトル
ATP（10 mM）：50 µL入り1バイアル。
MgCl2（1 M）：100 µL入り1バイアル。
30% BSA：1 mL入り1バイアル
ヤギ抗ウサギIgG HRP二次抗体：30 µL入り1バイアル
ROCK阻害剤Y-27632：150 µL入り1バイアル
活性化Rho関連キナーゼII（ROCK-II）：10 µg入り1バイアル
抗ホスホMYPT1（Thr696）抗体：抗ホスホ-MYPT1（Thr696）抗体10 µgを含有するバイアル1本
TMB/E基質：12 mL入り1ボトル
停止溶液：12 mL入り1ボトル
TBS、20倍濃縮：50 mL 20倍濃縮TBS入り1ボトル
20% Tween® 20 (v/v)：3 mL入り1ボトル
プレートシーラー：プレートカバー2個
アッセイ用希釈バッファーI：1 mL入り1ボトル
ATP（10 mM）：50 µL入り1バイアル。
MgCl2（1 M）：100 µL入り1バイアル。
30% BSA：1 mL入り1バイアル
ヤギ抗ウサギIgG HRP二次抗体：30 µL入り1バイアル
ROCK阻害剤Y-27632：150 µL入り1バイアル
活性化Rho関連キナーゼII（ROCK-II）：10 µg入り1バイアル
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC
signalword
Warning
hcodes
Hazard Classifications
Met. Corr. 1 - Skin Sens. 1
wgk
WGK 3
保管分類
10 - Combustible liquids
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
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jan
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。