Anti-GAD65 Antibody

65 kDa

グルタミン酸脱炭酸酵素（GAD、E.C.4.1.1.15）は、グルタミン酸をγ-アミノ酪酸（GABA）に変換する酵素で、高次脳領域の主要な抑制性伝達物質であり、膵島では傍分泌ホルモンとしてはたらくことが推定されています。GADの2つの分子型（65 kDaと67 kDa、お互いのaa同一性は64%）は高度に保存されており、いずれの型も、CNS、膵島細胞、精巣、卵管、卵巣で発現しています。これらのアイソフォームは、ラットやマウスの脳内の細胞質中に局在化して存在しています（Sheikh, S. et al. 1999）。GAD65は、ヒト第10番染色体上でコードされる両親媒性の膜アンカータンパク質(585a.a.）であり、小胞性GABAの産生を担っています。GAD67は細胞質に存在し（594 a.a.）、第2染色体上にコードされ、重要な細胞質GABAの産生を担っていると考えられています。GADの発現は、ラット脊髄の神経発達中に変化します。 GAD65はE13周辺の交連軸索で一時的に発現しますが、翌日にはダウンレギュレートされます。一方、GAD67の発現は主にこれらのニューロンの細胞体で増加します（Phelps, P. et al. 1999）。成熟ラット膵臓では、GAD65とGAD67が異なる局在を示すと考えられており、GAD65は主にインスリン含有ベータ細胞に、GAD67はグルカゴン含有（A）細胞に認められます（Li, L. et al. 1995）。GAD67の発現は著しく可塑的であると考えられ、実験操作（神経刺激や切断など）や病勢進行、統合失調症などの疾患の出現に反応して変化する可能性があります（Volk et al., 2000）。 2つのGADアイソフォームの共局在は、IDDMやSMSなどの特定の病態に関連したGAD65/GAD67の分布の変化も示しています。

精製ラット脳グルタミン酸デカルボキシラーゼ。

免疫組織染色：（1 μg/mL *プロトコルを参照）

ウェスタンブロッティング

最適な希釈濃度は、ご自身で決定してください。

MAB351のアプリケーションノート

免疫組織染色

1) 1%パラホルムアルデヒド、0.34% L-リジン、および0.05% m-過ヨウ素（1% PLP）を含有する100 mMリン酸緩衝液（pH 7.4）でラットを灌流します。

2) 1% PLPで1～2時間、脳を後固定します。

3) 30%スクロースを含有する100 mMリン酸緩衝液に脳を移し、シェーカープラットフォームに載せて+4°Cで48～60時間、ゆっくり撹拌します。

4) 滑走式ミクロトームを用いて、凍結小脳の30 mm切片を切り出します。切り出した切片は、冷却した100 mMリン酸緩衝液のバイアルに収集してください。

5) 1.5%正常血清および0.2% Triton X-100を含有するPBS中で、切片を30分間培養します。

6) シェーカープラットフォーム上で、MAB351（1.5%正常血清および0.2% Triton X-100を含有するPBSで1 μg/mLに希釈）により切片を+4°Cで12～36時間培養します。

7) シェーカープラットフォーム上で、切片をPBS中で8回洗浄します。洗浄時間は1回あたり10～15分としてください。

8) 標準的な二次抗体検出システム（PAP、ABC、など）を用いて検出します。

9) 切片をマウントし、脱水させ、カバースリップで覆います。

抗GAD抗体。65 kDaアイソフォーム、クローンGAD-6は、グルタミン酸デカルボキシラーゼのレベルを検出します。また、IH、WBでの使用が文献発表され、検証されています

研究のカテゴリ
神経科学

研究のサブカテゴリ
神経伝達物質および受容体

脳で特定されている2つのGADアイソフォームのうち、分子量が低い方のアイソフォームを認識します（Gottlieb, et al., 1986; Chang & Gottlieb, 1988）。このモノクローナル抗体は、脳または膵臓の免疫組織化学的局在に使用できます。抗GADは、ウエスタンブロッティングでの精製GADの標識にも使用されています（Chang & Gottlieb, 1988）。

フォーマット：精製

精製プロテインA

精製免疫グロブリン。 10 mMリン酸カリウム、70 mM塩化ナトリウム、pH 7.4、0.02%アジ化ナトリウムから凍結乾燥されています。100 μLの無菌水で溶解してください（1 mg/mL）。

凍結乾燥した製品は、-20°Cで最長12か月保存できます。溶解後は、未希釈アリコートで-20°Cで最長6か月冷凍保存できます。凍結・融解サイクルの繰り返しは避けてください。

コントロール
ラット脳組織

ヒト脳ライセート

濃度：ロットに固有の濃度につきましては試験成績書をご参照ください。

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