抗リン酸化ユビキチン（Ser65）

ユビキチン（Ub）は、ヒトにおいて、最初はUBB遺伝子（Gene ID 7314）にコードされる229アミノ酸のポリユビキチンB（UniProt P0CG47）前駆体タンパク質またはUBC遺伝子（Gene ID 7316）にコードされる685アミノ酸のポリユビキチンC前駆体タンパク質（UniProt P0CG48）として産生されます。Polyubiquitin-BのC末端（Cys229）およびPolyubiquitin-CのC末端（Val685）は翻訳後に除去され、続いてさらなる翻訳後切断が起こり、アミノ酸76個でできた同一ユビキチン（別名：high mobility group nonhistone protein HMG-20）分子のコピーが複数得られます（Polyubiquitin-Bあたり3コピーとPolyubiquitin-Cあたり9コピー）。異なるUb Lys残基を介した標的タンパク質の共有結合修飾は、細胞DNA修復、ER関連分解（ERAD）、転写活性化、リソソーム・プロテアソーム分解中のよく知られた事象です。PINK1（PTEN induced putative kinase 1）はSer/Thrキナーゼであり、脱分極ミトコンドリアに特異的に蓄積し、そこでUbのSer65およびパーキンN末端Ub様（UBL）ドメイン内の対応するSer残基をリン酸化することでパーキン（Park2）E3ユビキチン（Ub）リガーゼ活性の正の調節因子として機能します。リン酸化Ubは、リン酸化パーキンとそのGINGO0ドメイン内でアロステリックに相互作用して、立体構造の変化を誘導し、パーキンRING2ドメインの触媒システインを露出させて、リガーゼを完全活性化します。NMRを用いた立体構造試験により、Ser65リン酸化Ubが溶液中では2つの立体構造で存在することが明らかになっています。主な立体構造では表面特性の変化が示され、2つ目のリン酸化Ubの立体構造では、2つの残基がUbコアに入ることでC末端テールが引っ込んでいます。Ub Ser65リン酸化は、E1酵素が介在するE2酵素チャージにはほとんど影響しておらず、主にE2酵素の放出に影響を及ぼしてポリUb鎖を形成します。また、大部分のdeubiquitinase（DUB）（USP8、USP15、USP30など）は、Lys63-linked poly-phosphoUbに対する活性が損なわれていることが分かっています。

実測値：約17/8および約45～250 kDa。算出値：8.565/17.112/25.66/34.21 kDa（モノ／ジ／トリ／テトラ-ユビキチン）。約45～250 kDaのバンドは、Ser65リン酸化Ubを持つユビキチン化タンパク質を示しています。一部のライセートでは、特性が明らかになっていないバンドが認められることがあります。

リン酸化Ser65を有するユビキチン標的領域配列に相当するKLH結合直鎖ペプチド。

このウサギポリクローナル抗リン酸化ユビキチン（Ser65)（カタログ番号ABS1513-I）を用いたユビキチンSer65リン酸化の検出は、免疫細胞染色およびウェスタンブロッティングでの使用が検証されています。

免疫細胞染色：希釈倍率1:500で使用、PINK1発現HeLa細胞中でCCCP（カタログ番号215911）処理誘導ユビキチンSer65リン酸化を検出できます。

ウェスタンブロッティング：希釈倍率1:5,000で使用、リコンビナントユビキチンのGST-PINK1触媒Ser65リン酸化を検出できます。

免疫細胞染色：希釈率1:200で使用、CCCP処理の有無にかかわらず、PINK1発現HeLa細胞中のリン酸化ユビキチン（Ser65）を検出できます。（Noriyuki Matsuda博士のご厚意による提供）。

100%配列相同性に基づいて、広範囲の種と反応すると予測されます。

このポリクローナル抗体は、Ser65リン酸化ユビキチン（Ub）およびSer65リン酸化ユビキチンを含むユビキチン化タンパク質（オリゴUbとポリUbを含む）のみを検出します。Ub Ser65リン酸化のないUbやユビキチン化タンパク質に対する反応性はありません。

PINK1発現HeLa細胞においてウェスタンブロッティングにより評価済み。

ウェスタンブロッティング：希釈倍率1:1,000で使用、CCCP（カタログ番号215911）処理したPINK1-発現HeLa細胞からのライセート10 µgにおいて細胞ユビキチンSer65リン酸化誘導を検出できます。

先発品：ABS1513