Anti-Calreticulin Antibody, arginylated (Nt-Glu18)

Calreticulin（UniProt P27797; 別名：Calregulin, CRP55, CRT, Endoplasmic reticulum resident protein 60, ERp60, grp60, HACBP）はヒトのCALR（別名：CRTC）遺伝子（遺伝子ID 811）によってコード化されています。Calreticulin（CRT）、BiP（GRP78または熱ショック70 kDaタンパク質5）、およびタンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（PDI）はER内腔畳みこみ因子であり、他のPIM酵素と連携して、新しく合成されたタンパク質がERから放出される前のプロセスを補助します。CRT、BiP、およびPDIのそれぞれは、合成後に翻訳後信号ペプチド除去の対象となり、新規に形成されたN-末端にそれぞれE18、E19、およびD18を露出します。成熟タンパク質のN-末端のDとE残基はアルギニン-tRNA-タンパク質転換酵素による、1/ATE1を触媒とした、アルギル化を許容してアルギル化成熟タンパク質（R-CRT、R-BiP、R-PDI）が形成され、これと同時に細胞の局在化状態も変化して非ER機能への参加にそなえます。一般に、刺激を受けていない細胞で検出できるのはR-CRTとR-PDI（R-BiP非該当）の基礎レベルに限られますが、細胞質dsDNAへの曝露とプロテアソーム阻害はこれら3種類すべてのタンパク質のN-末端アルギル化レベルを向上させました。これは、細菌の侵襲に対抗する先天性免疫応答が役割を共有していることを意味します。さらに、プロテアソーム阻害は細胞レベルでのR-CRT、R-BiPおよびR-PDIを増大させますが、thapsigargin処理により誘導されるERストレスがこれをさらに亢進させます。この知見はERストレスがER内腔でのCRT、BiPおよびDPI供給を加速させてN-末端アルギル化へ寄与することを示唆しています。

実測値：約55 kDa。算出値：46.6 kDa。一部のライセートでは、特性が明らかになっていないバンドが認められることがあります。

アルギニル化成熟ヒトCalreticulinのN-末端配列に対応する直鎖ペプチド。

エピトープ：N末端

このウサギポリクロナールAnti-Calreticulin [アルギニル化（（Nt-Glu18）、カタログ番号 ABS1671）を使用して、成熟カルレティキュリン（calreticulin）を検出しました。この方法はELISA、免疫細胞染色、ウェスタンブロッティングでの使用が検証されています。

免疫細胞染色：代表的なロットを希釈倍率1:500で使用して、前処理（3 µM MG132と200 nM thapsigarginで18時間）後のHela細胞中のCalreticulin Nt-Glu18（アルギニル化誘導体）を検出しました（Yong Tae Kwon, Ph.D. , Seoul National University, Koreaのご厚意による）。

ウェスタンブロッティング：代表的なロットの0.2 µg/mLを使用して、前処理（3 µM MG132と200 nM タプシガルギンで18時間）後のHela細胞中のCalreticulin Nt-Glu18（アルギニル化誘導体）を検出しました（Yong Tae Kwon, Ph.D. , Seoul National University, Koreaのご厚意による）。

ELISA: 代表的なロットを使用して抗原性ペプチドを検出しましたが、N-末端のGlu18をアルギニル化しておかないとコントロールペプチドを検出できません（Cha-Molstad, H., et al. （2015）.Nat. Cell Biol. 17（7）:917-929）。

ウェスタンブロッティング: 代表的なロットを使用してCalreticulin Nt-Glu18のアルギニル化誘導を検出しました：アルギニン-tRNA-タンパク質トランスフェラーゼ1（ATE1）1A7Aアイソフォームの過剰発現、または、Hela細胞での、poly（dA:dT）を含む各種dsDNAのトランスフェクション。プロテアソーム阻害とERストレス（18時間の10 µM MG132と100 nM thapsigargin処理によって誘導）の組み合わせによる相乗効果が2′つの薬剤の効能を高めて細胞内Calreticulin Nt-Glu18のアルギニル化を誘導しました（Cha-Molstad, H., et al. （2015）.Nat. Cell Biol. 17（7）:917-929）。

研究のカテゴリ
シグナル伝達

このウサギポリクロナール抗体は特異的に抗原性ペプチドを検出しますが、N-末端Glu18の位置にあるコントロールペプチドを検出するためにはアルギニル化が必要です（Cha-Molstad, H., et al. （2015）.Nat. Cell Biol. 17（7）:917-929）。

PBSおよび0.05%アジ化ナトリウムを含むバッファー中の精製ウサギポリクローナル抗体

アフィニティー精製。

2～8°Cで受領日から1年間安定です。

HEK293細胞ライセートのウェスタンブロットで評価されています。

ウェスタンブロッティング：この抗体を1 µg/mL使用して、前処理（3 µM MG132と200 nM タプシガルギンで17時間）後のHEK293細胞から調製した7.5 µgのライセート中のCalreticulin Nt-Glu18アルギニル化誘導体を検出しました。

濃度：ロットに固有のデータシートを参照してください。

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