Anti-Neurofilament H (200 kDa) Antibody

ニューロフィラメントは、軸索細胞質を支える細胞骨格の主要要素としての役割を担う中間径フィラメントの一種です。 ニューロフィラメントは、軸索の原線維成分として最も多く、軸索微小管と比較して平均3～10倍多く存在します。 ニューロフィラメント（直径10 nm）は、3本の前原線維が絡み合っており、その前原線維自体も単一タンパク質の2つの四量体プロトフィラメント複合体から構成されています。ニューロフィラメント・トリプレットタンパク質（68/70、160および200 kDa）は、中枢および末梢神経系の両方でみられ、通常はニューロンに特異的です。68/70 kDaのNF-Lタンパク質は糸状構造内に自己会合できますが、160 kDaのNF-Mおよび200 kDaのNF-Hタンパク質は、共会合するために68/70 kDaのNF-Lタンパク質の存在が必要です。 神経腫、神経節神経腫、神経節膠腫、神経節芽細胞腫および神経芽細胞腫は、ニューロフィラメントについて陽性染色されます。 ニューロフィラメントは、一般的にニューロン限局的ですが、傍神経節腫および副腎・副腎外褐色細胞腫で検出されています。カルチノイド腫瘍、皮膚の神経内分泌がんおよび肺燕麦細胞がんもニューロフィラメントを発現しています。 ニューロフィラメントの詳細情報については、CHEMICONテクニカルサポート部門の神経系細胞タイプ特異的マーカーチャートオンラインをご覧ください。

精製神経フィラメントポリペプチド（Debus et al., 1983）。

この抗ニューロフィラメント200 kDa抗体、クローンNE14を用いたニューロフィラメント200 kDaの検出は、IHでの使用が検証されています。

免疫組織染色：5～10 μg/mL（以下のプロトコルを参照）。

最適な希釈濃度は、ご自身で決定してください。

抗ニューロフィラメント200 kDの免疫組織染色プロトコル

最適な試料は、急速凍結した組織サンプルの凍結切片から得られます。凍結切片は、空気乾燥した後、-15 ～ -25°Cにおいて10分間、acetone固定します。余分なacetoneは15～25°Cで蒸発させます。アルコールで固定してparaffinに包埋した材料も使用できます（Altmannsberger et al., 1982を参照）。この抗体は、短時間（10分間）formaldehydeで固定した組織と反応するようです（Debus et al., 1983）。その他の固定条件は、まず研究者が検証してください。

ウシ胎児血清で15～25°Cにおいて20～30分間切片を覆うことで非特異的結合部位をブロッキングすることは有益です。余分なウシ胎児血清は、抗原溶液を添加する前に、デカンテーションで除去します。単一細胞または細胞スメアを細胞用遠心機で調製した試料もacetoneで固定します。ただし、これらの試料は、空気乾燥してはいけません。代わりに、余分なacetoneはリン酸緩衝生理食塩水（PBS）でさっと洗って除去します。

その後のさらなる処理は次のとおり：

試料を10～20 μLの抗体溶液で覆い、37°Cの加湿チャンバー内で1時間インキュベーションします。

スライドをPBSにさっと浸したあと、PBSで3分間、3回洗浄します（洗浄ごとに未使用のPBSに取り替えます）

試料の周縁部の水分を拭き取り、試料を10～20 μLの抗マウスIg-FITC抗体または抗マウスIg-POD抗体で覆い、37°Cの加湿チャンバー内で1時間インキュベーションします。

スライドを上記のように洗います。

試料は、いずれのステップにおいても乾燥させてはいけません。

間接免疫蛍光法を使用する場合、試料は適切な包埋剤（Moviol、Hoechstなど）で覆い、蛍光顕微鏡下で検討してください。PODコンジュゲートを二次抗体として使用している場合、試料は基質溶液（下記参照）で覆い、赤褐色がはっきりと見えるるようになるまで15～25°Cでインキュベーションしてください。ネガティブコントロール（例：二次抗体のみ）は、このインキュベーションの間に色の変化がないはずです。続いて、基質をPBSで洗い流し、試料は、必要に応じてヘマトキシリン染色液で約1分間染色します。ヘマトキシリン溶液はPBSで洗い流し、試料を包埋して、検討します。

基質溶液：

Aminoethyl-carbazole：

2 mgの3-amino-9-ethylcarbazoleを1.2 mLのdimethylsulfoxide に溶解し、28.8 mLの0.05 M Tris-HCl（pH 7.3）と20 μLの3% H 2 O 2 (w/v)を加えます。溶液は毎日新しいものを調製します。

Diaminobenzidine:

25 mgの3,3′-diaminobenzidineを50 mLの0.05 M Tris-HCl（pH 7.3）に溶解し、40 μLの3% H2O2 (w/v)を加えます。溶液は毎日新しいものを調製します。

研究のカテゴリ
神経科学

研究サブカテゴリー
ニューロフィラメントおよび神経細胞代謝

神経細胞およびグリアマーカー

この抗体は、ニューロフィラメント200 kDと反応します。

フォーマット：精製

精製免疫グロブリン。 液体。バッファー = 0.02Mリン酸バッファー、0.25M NaCl、0.1%　sodium azide含有

未希釈アリコートで2～8°Cで最長6カ月間冷蔵保存できます。凍結させないこと。

濃度：ロットに固有の濃度につきましては試験成績書をご参照ください。

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