抗プレラミンA抗体、クローン7G11

ラミンAは、核の形状とサイズを決定する内膜の下にあるタンパク質ネットワークである核ラミナの重要な構成要素です。ラミンAをコードしている同一の遺伝子（マウス種のLmna、Dhe、またはLamn1、Gene ID 16905）が、選択的スプライシングを受けたプレラミンCアイソフォーム（UniProt P48678-2およびP48678-3）もコードしています。マウスラミンA（UniProt P48678-1）はまず、末端にCAAXモチーフがある、665アミノ酸のプレラミンAとして作られます。これがさらに4つの酵素ステップによる翻訳後プロセシングを受けて、成熟ラミンAになります。Cys662のファルネシル化、最後の3つのアミノ酸（a.a. 663～665）の細胞内タンパク質分解的切断、Cys662のカルボキシルメチル化、およびファルネシル化されたCys662を含む残りのプロペプチド配列（a.a. 648～662）の最終的な細胞内タンパク質分解的除去は、ER膜亜鉛メタロプロテイナーゼZMPSTE24によって触媒されます。

実測値：約74 kDa。この抗体は、A型プレラミンは検出しますが、アイソフォームCは検出しません。

エピトープ：C末端プロペプチド配列

マウスプレラミンAのC末端プロペプチド配列に相当する直鎖ペプチド。

この抗プレラミン-A抗体、クローン7G11は、プレラミン-Aの検出において、ウェスタンブロッティングおよび免疫蛍光での使用が検証されています。

ウェスタンブロッティング：0.5 µg/mLで使用、C2C12細胞ライセートにおける2日間のFTI（5 µM、カタログ番号344550）処理誘発性プレラミンA蓄積を検出できます。
免疫蛍光染色：ケラチノサイト特異的Fntbノックアウトマウス由来のパラホルムアルデヒド固定およびパラフィン包埋皮膚切片を用いた蛍光免疫組織染色により、代表的なロットは、ケラチノサイトではアップレギュレートされたプレラミンA免疫反応性を検出しましたが、皮膚線維芽細胞では検出しませんでした。一方、組織/細胞タイプ非特異的Zmpste24ノックアウトマウス由来のケラチノサイトおよび真皮線維芽細胞ではプレラミンAアップレギュレーションが認められました（Lee, R., et al. (2010).Hum.Mol. Genet.19(8):1603-1617）。
免疫蛍光染色代表的なロットは、C662S非ファルネシル化プレラミンAのみを産生し（nPLAO/nPLAO）ラミンCは産生しないトランスジェニックマウス系統由来のメタノール固定およびTween透過処理凍結肝臓切片を用いた蛍光免疫組織染色により、肝細胞の核縁を染色しました。一方、野生型マウスまたは野生型プレラミンAのみを産生し（PLAO/PLAO）ラミンCは産生しないマウス系統由来の肝臓切片では、細胞プレラミンA濃度は検出されませんでした（Davies, B.S., et al. (2010).Hum.Mol. Genet. 19(13):2682-2694）。
ウェスタンブロッティング：代表的なロットは、マウス線維芽細胞においてファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（FTI）処理時の細胞プレラミンA蓄積を検出しました。クローン7G11は、プレラミンAを選択的に検出しますが、成熟ラミンAまたはラミンCは検出しません（Lee, R., et al. (2010).Hum.Mol. Genet.19(8):1603-1617）。
注記：正常状態では、細胞プレラミンA濃度は検出レベル未満です。新たに産生されたプレラミンAはすべて、すみやかにさらにプロセシングされ、成熟ラミンAとなります。細胞のプレラミンAを抗体に基づいて検出できるように、細胞のファルネシルトランスフェラーゼおよび/またはZMPSTE24活性は、阻害する必要があります（遺伝子ノックアウトまたは阻害剤処理による）。

研究カテゴリー
細胞構造

研究サブカテゴリー
分子接着（CAM）

クローン7G11は、ファルネシル化状態にかかわらずプレラミン-Aを検出しますが、C末端プロペプチド配列のない成熟ラミン-A（a.a. 1-647）は検出しません。クローン7G11は、成熟前または成熟後のスプライシングされたアイソフォームC1およびC2（ラミン-C; P48678-2およびP48678-3）は検出しません。

0.1 Mトリス-グリシン（pH 7.4）、150 mM NaCl、0.05%アジ化ナトリウムを含むバッファー中の精製ラットモノクローナルIgG2aκ抗体。

フォーマット：精製

精製プロテインG

2～8°Cで受領日から1年間安定です。

RAW264.7細胞ライセートのウェスタンブロッティングで評価されています。

ウェスタンブロッティング：0.5 µg/mLで使用、マウスRAW 264.7マクロファージにおける2日間のFTI-276（5 µM; カタログ番号344550）処理誘発性プレラミンA蓄積を検出できます。

濃度：ロットに固有のデータシートを参照してください。

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