PluriSTEM^® ディスパーゼ-II 溶液

トリプシン、コラゲナーゼ、プロナーゼのようなタンパク質分解酵素は、一般的に組織や細胞の分散に使用されます。しかし、これらの酵素はしばしば細胞を損傷し、インキュベーション中に不安定な上に不均質になる場合があり、マイコプラズマ汚染の原因にもなります。ディスパーゼ-IIは、広範囲の異なる組織および器官由来の細胞の調製に使用されます。ディスパーゼ-IIは、in vitroで培養された多くの組織や細胞を迅速かつ効果的でありながら穏やかに分離することが証明されています。ディスパーゼは細胞膜に損傷を与えないため、特に組織の解離や継代培養に適しています。

PluriSTEM ディスパーゼ-II は、PluriSTEM ヒト ES/iPS 培地 (SCM130) と併用して、ヒト胚性幹細胞および人工多能性幹細胞の培養・継代に使用できることが実証されています。

ディスパーゼ-II 酵素は Bacillus polymyxa 中で生産されます。

最適な継代技術はユーザーが決定する必要があり、細胞の種類や培養条件によって異なります。

1.6 ウェルプレートに 1:20 Matrigel をコーティングします（各ウェル 1.5 mL）。 2 ～ 8ºC で一晩インキュベートするか、使用前に少なくとも 30 分～ 1 時間 RT でコーティングします。
2.Matrigel コーティングを除去します。 各ウェル当たり 2 mL の完全培地を加えます。
3.培養中の分化領域を除去します。
4.培地を吸引します。
5.2 mL の PBS で 1 回洗浄します。
6.各ウェル当たり 1.5 mL のディスパーゼ II を加えます。 37ºC で 7 分間インキュベートします。
7.2 mL PBS で 2 回洗浄します（Mg および Ca 不使用）。
8.各ウェルに 2 mL の完全培地を加え、細胞スクレーパーでコロニーを剥離します。
9.剥離した細胞を 15 mL コニカルチューブに回収します。
10.800 rpmで5分間遠心します。
11.適切な量の完全培地に再懸濁します。 細胞密度にもよりますが、一般的な分割比率は 1:5 – 1:6 です。 細胞は、PluriSTEM ヒト ES/iPS 培地を用いて 5 ～ 6 日後に継代可能な状態になります。

研究のサブカテゴリ
酵素&生化学

研究カテゴリー
幹細胞研究

製品は滅菌 DMEMF12 に 1 mg/mL で含まれています。製品は凍結前に 0.2 ミクロンのフィルターでろ過されています。
ディスパーゼ-II 酵素は Bacillus polymyxa 中で生産されます。

-20°Cで受領日から最大4カ月間保存できます。凍結融解後は、作業用に少量ずつ分注し、-20ºCで保存してください。適切な酵素活性を維持するため、凍結融解の繰り返しは避けてください。

溶液は赤色で、微粒子は含まれていません。溶液は滅菌済みで、細胞培養に適しています。

PLURISTEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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