5′/3′RACEキット、第2 世代

cDNA末端の迅速増幅（RACE）は、部分的に分かっている配列から全長cDNAを迅速に得るために使用される一般的な技術です。5′/3′ RACEキットには、トランスクリプター逆転写酵素および組換え末端転移酵素が含まれています。トランスクリプター逆転写酵素は、最大14 kbの5′または3′ cDNAフラグメントを高感度かつ迅速に増幅するために全長cDNAを転写します。熱安定性（+65℃まで）を有するため、高度な二次構造を持つGCリッチなテンプレートとともに作用できます。トランスクリプター逆転写酵素を使用することで高感度に到達でき、高効率でcDNAが合成され、長いRACE産物が生成されます。組換え末端転移酵素は、ホモポリマーのAテールをcDNAの3′ 末端に付加するために使用します。ポリ（A）⁺テールは、オリゴ（dT）-アンカープライマーによる不適切な切断の可能性を低減させ、G/Cハイブリダイゼーションに比べてA/Tハイブリダイゼーションが弱いという問題を克服します。また、オリゴ（dT）-アンカープライマーを内側にハイブリダイズし増幅産物を切断するには、A残基の長いストレッチが必要です。遺伝子特異的プライマーおよびオリゴ（dT）-アンカープライマーを使用して、テール化cDNAをPCRで増幅します。得られたcDNAの増幅を、ネステッド特異的プライマーおよびPCR-アンカープライマーを使用した2番目のPCRで実施し、後の実験のためにRACE産物を適切なベクターにクローニングできるようにします。

5′/3′ RACEキット、第二世代は以下に適します。

• RNA分子の構造的研究および発現の研究
• 全長cDNAの生成
• 低コピーRNAメッセージからの5′または3′末端の単離および特性評価
• 第一鎖cDNA合成
• 希少mRNAの増幅および詳細なクローニング
• エクソントラッピング法との併用
• RACE反応の産物はクローニングなしに直接配列が可能

熱不活性化：末端転移酵素：70℃で10分間
トランスクリプター逆転写酵素：85℃で5分間

コントロール反応には、コントロールRNAをコントロールプライマーneo1/revを使用して第1鎖cDNAに転写させる反応が含まれます。cDNAの増幅は、コントロールプライマーneo2/revおよびneo3/forを使用して行い、157 bpのPCR産物が得られます。精製cDNAのテーリングはdATPを用いて行います。cDNAの増幅は、オリゴdT-アンカープライマーおよびコントロールプライマーneo2/revを使用して行い、293 bpのPCR産物が得られます。

1つのキットに12のコンポーネントが含まれます。

ライフサイエンス研究専用。診断には使用しないこと。