ビオチンニックトランスレーションミックス

便利な酵素とヌクレオチドの混合物。
ニックトランスレーションは、DNaseとDNAポリメラーゼの組合せを利用してDNAらせんの1本鎖にニックを入れ、その後、ポリメラーゼが調べるか、ニック部位を「校正」する際に標識ヌクレオチドを取り込みます。ビオチン-16-dUTPとdTTPのモル比は、新しく合成されたDNAの20～25番目のヌクレオチドがすべてビオチンで確実に修飾されるように調整します。DNAのハプテンのこの密度により、免疫学的検出反応において最高の感度が得られます。
大きいプラスミド、コスミド、およびPCR断片はすべてこの方法で定期的に使用され、DNAは線状またはスーパーコイル状になります。個々のテンプレートは、標準的な90分間の反応で一貫した結果をもたらし、平均プローブ長は200塩基対～500塩基対になります。

ビオチン-16-dUTPで標識したin situハイブリダイゼーションのための高感度プローブの調製用。
注：この混合物はフィルターハイブリダイゼーション技術にも使用できますが、高感度のフィルターハイブリダイゼーション用プローブにはRoche Applied ScienceのBiotin-High Prime（ビオチン-ハイプライム）のご使用をお勧めします。
他のハプテンを用いたin situプローブの非放射性標識用に、Roche Applied ScienceよりDIG-Nick Translation Mix（DIG-ニックトランスレーションミックス）またはNick Translation Mix（ニックトランスレーョンミックス）が販売されています。

熱失活：1 μL 0.5 M EDTA（pH 8.0）の添加および65°Cで10分間の加熱により、反応を停止させます。

ニックトランスレーション法は、MgCl₂の存在下で低酵素濃度でランダムに分布したニックを、DNAに導入するDNase Iの能力に基づいています。E. coli（大腸菌）DNAポリメラーゼIは、ニックの3'-OH末端をプライマーとして用いて、未変成の鎖に相補的なDNAを5' → 3'方向に合成します。DNAポリメラーゼIの5' → 3' エクソヌクレオチド分解活性は、同時に合成方向にヌクレオチドを除去します。ポリメラーゼ活性により、除去されたヌクレオチドが、同位体標識またはハプテン標識されたデオキシリボヌクレオシド三リン酸に順次置換されます。このように、低温（+15°C）では反応液中の非標識DNAは、新しく合成された標識DNAに置き換わります。

1バイアルに50%グリセロール（v/v）中の5倍濃度安定化反応緩衝液およびDNAポリメラーゼI、DNase I、0.25 mM dATP、0.25 mM dCTP、0.25 mM dGTP、0.17 mM dTTPおよび0.08 mM ビオチン-16-dUTP。

アッセイ時間：100分間

サンプル材料
スーパーコイル状および線状プラスミドDNA
スーパーコイル状および線状コスミドDNA
精製されたPCR産物
注：ニックトランスレーションの前にテンプレートを変性する必要はありません。

ドットスポットアッセイにより機能テスト済み。

ライフサイエンス研究専用です。診断にはご使用になれません。