ジヒドロ葉酸レダクターゼ ヒト

ヒトDHFRは、見かけ上の分子量25 kDaを有する、186個のアミノ酸からなるタンパク質です。ヒトDHFRは、大腸菌DHFRと30%相同で、脊椎動物DHFRと最高70% 相同です。

ヒトジヒドロ葉酸レダクターゼは、ウシバベシアにおける緑色蛍光タンパク質の安定的な発現およびチオレドキシンペルオキシダーゼ1遺伝子の標的化破壊を調べる研究に使用されています。ヒトジヒドロ葉酸レダクターゼは、二元複合体としてのヒトジヒドロ葉酸レダクターゼの構造解析を調べる研究でも使用されています。

ヒトジヒドロ葉酸レダクターゼは、次の用途で使用されています。

• ウシバベシアにおける緑色蛍光タンパク質の安定的な発現およびチオレドキシンペルオキシダーゼ1遺伝子の標的化破壊を調べる研究
• 二元複合体としてのヒトジヒドロ葉酸レダクターゼの構造解析に関する研究
• 酵素阻害研究に使用するin vitro動態アッセイに関する研究

Km^5,6
NADPH 0.16 mM
7,8-ジヒドロ葉酸 0.03 mM
8-メチルプテリン 0.13 mM
Ki⁷
葉酸 2.6x10-5 mM
メトトレキサート 6.1-9x10^-9

ヒトDHFR遺伝子およびその他の哺乳類種のDHFR遺伝子は、遺伝子増幅のメカニズムまたはアミノ酸変異誘発によりメトトレキサートの阻害作用を克服します。ジヒドロ葉酸レダクターゼ（DHFR）は、ジヒドロ葉酸（DHF）からテトラヒドロ葉酸（THF）へのNADPH依存的還元を触媒し、これよりかなり低い速度で葉酸からTHFへの変換を触媒します。反応産物THFは、チミジル酸合成酵素によるデオキシウリジル酸（dUMP）からデオシキチミジル酸（dTMP）への変換に必須な補酵素です。チミジン合成における主な酵素です。 したがって、DHFRはDNA合成において重要な酵素であり、創薬やがん治療のターゲットとなっています。由来の異なるDHFR間の多様性のため、トリメトプリム（抗菌剤、抗真菌剤）、ピリメタミン（抗原虫薬）、およびメトトレキサート（MTXI）（抗悪性腫瘍剤、乾癬治療薬、抗炎症剤）などの種特異的DHFR阻害剤の開発が可能になりました。

ヒトジヒドロ葉酸レダクターゼ（DHFR）は、チミジン合成における主要な酵素です。テトラヒドロ葉酸（THF）へのジヒドロ葉酸（DHF）の還元を触媒します。速度ははるかに落ちますが、葉酸からTHFへの変換も触媒します。チミジンはDNA合成に必要な基質であるため、DHFRは抗がん剤開発の標的です。メトトレキサートはプロトタイプジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害物質です。Sigmaのこの酵素は、Leishmaniasis donovaniプテリジンレダクターゼ1（PTR1）の阻害研究に使用されています。この酵素は、Mycobacterium smegmatisから精製されたタンパク質MS0308のDHFR活性を測定する際の陽性コントロールとしても使用されています。

10 mM Tris（pH 8）、 1 mM EDTA、 0.5 mM DTT、 5 μM NADPH、プロテアーゼ阻害剤、および 50%グリセロールで調製した溶液。

1 unitは、pH 7.5、22°C、1分間で、1.0 μmolのジヒドロ葉酸をテトラヒドロ葉酸に変換します。