タンパク質電気泳動用ゲル染色剤
電気泳動による分離後、タンパク質バンドは通常、ゲル染色剤を用いて可視化されます。タンパク質ゲル染色剤は、色素結合または発色反応のいずれかを利用し、タンパク質と選択的に反応してゲルを染色します。タンパク質ゲル染色剤の選定は、通常、初期のサンプル量、希望する検出方法、および下流の分析における互換性の要件に基づいて行われます。
Products
固定液
ゲル電気泳動の後、通常、染色前にタンパク質が分散するのを防ぐために、タンパク質をゲル内で「固定」します。一部のゲル染色剤には、染色前にゲルを固定する必要をなくす化学物質が含まれています。
比色法によるタンパク質ゲル染色
剤
- クーマシー・ブリリアント・ブルーは、ポリアクリルアミドゲル上のタンパク質を、タンパク質のアミノ基およびカルボキシル基との静電相互作用を通じて染色するために使用されます。
- ReadyBlue™ タンパク質ゲル染色液は、ポリアクリルアミドゲル用の迅速かつ高感度のコロイド状クーマシー染色剤であり、すぐに使用できる溶液として提供されるため、より迅速かつ簡便なプロトコルを実現します。ReadyBlue™ は、比色法または IR 蛍光法を用いて画像化することができます。 この安全な製剤には有機溶媒やリン酸が含まれておらず、最大3回まで再利用可能です。ReadyBlue™では、バンドあたり2 ngまでの高感度が実証されています。
- EZBlue™ ゲル染色試薬は、便利で高感度かつ安全なクーマシー・ブリリアント・ブルーG-250コロイド型タンパク質染色剤であり、タンパク質電気泳動の結果を向上させると同時に、染色時間を大幅に短縮します。コロイド型染色剤であるため、ゲル自体ではなくタンパク質のみと反応します。 バックグラウンド染色が低減されるため、ポリアクリルアミドゲルやPVDF膜上で、タンパク質バンドをほぼ即座に可視化できます。脱色工程は不要ですが、水で洗浄することでバンドを鮮明にし、バックグラウンドをクリアにすることができます。EZBlue™試薬は極めて高感度で、わずか5 ngのタンパク質も検出可能です。
- 「可逆性タンパク質検出キット」は、ナイロン、ニトロセルロース、PVDF膜、またはPAGEゲル上のタンパク質を染色するために設計された独自の検出システムであり、その検出感度はクマルシン染色と同等です。他のほとんどの染色剤は、膜との強い電荷相互作用により、ナイロン膜上で高いバックグラウンドを生じさせます。EDTA溶液を使用することで染色を容易に可逆化できるため、ブロットをウェスタンブロッティングやアミノ酸配列解析に再利用することができます。
- ナフトールブルーブラック色素は、ポリアクリルアミドゲル、アガロースゲル、およびニトロセルロース膜上のタンパク質の染色に使用できます。電気泳動後、ゲル内のタンパク質を固定することを推奨します。 その後、ゲルを7%(v/v)酢酸中の0.1%ナフトールブルーブラックで少なくとも2時間染色し、7%(v/v)酢酸溶液で脱色します。検出感度はクーマシーブルーの約20%です。
- 最高の感度を誇るProteoSilver™ シルバーステインキットは、3~12分のインキュベーション時間で、バンドあたり0.1 ng以上のタンパク質を検出可能です。この染色法は、発現量が極めて少ないタンパク質に推奨され、MALDI-TOFアプリケーションにも対応しています。
蛍光タンパク質ゲル染色剤
- EZFluor™ 1ステップ蛍光タンパク質ゲル染色剤は、固定処理を必要とせず、5~30分の単一の染色ステップのみで完了する即用型の蛍光タンパク質ゲル染色剤であり、バンドあたり約1~10 ngという微量のタンパク質を検出可能です。この染色法は、質量分析およびエドマン法に基づく配列決定と完全に互換性があります。
- EZFluor™ UV 1ステップ蛍光タンパク質ゲル染色剤は、UVトランスイルミネーターおよびエチジウムブロマイドフィルターを用いたイメージング用に設計された、すぐに使用できるタンパク質ゲル染色剤であり、質量分析法と互換性があります。
- SYPRO® Ruby タンパク質ゲル染色剤は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)によって分離されたタンパク質を検出するための、すぐに使用可能な超高感度蛍光染色剤です。この染色剤は、2次元PAGEでの使用を特に想定して設計されていますが、1次元PAGEや等電点焦点化(IEF)ゲルにおいても優れた選択肢であることが実証されています。 SYPRO® Ruby タンパク質ゲル染色剤は、多くの銀染色法に匹敵する感度を実現します。
- SYPRO® OrangeはSYPRO® Redと類似していますが、やや鮮やかで、バックグラウンド蛍光がわずかに高くなります。この色素は、UVまたは広帯域の光照射によって効率的に励起されます。ブロット上のタンパク質やIEFゲル内のタンパク質の染色には適しておらず、2次元ゲル上のタンパク質を染色する際には感度が低下します。
脱色試薬
- CoZapは、クーマシーブルー染色の迅速な除去に使用されます。独自のCoZapパッドを脱色トレイに直接設置することで、溶液中の遊離色素をすべて吸収するため、脱色溶液の交換が不要になります。
関連リソース
- タンパク質染色試薬選択ガイド
Sigmaでは、タンパク質可視化のためのEZBlue™ 試薬とProteoSilver™ 試薬をご提供しています。プロテオミクスや従来のPAGEフォーマットに適しています。
- ハンドブック:タンパク質ブロッティングのコツとテクニック
本書は、タンパク質ブロッティングおよび検出技術の進歩に積極的に取り組んでいる当社のアプリケーションサイエンティストたちの、蓄積された知見をまとめたものです。
- パンフレット:ウェスタンブロッティングの再考
ウェスタンブロッティングのワークフローの各工程を改善するために設計された当社の製品をご覧ください。
- SDS-PAGEによるタンパク質のサイズ別分離の基礎
PAGEの基礎ポリアクリルアミドゲルを使用する、タンパク質のサイズ別分離のためのSDS-PAGEの背景およびプロトコルを説明します。
- ReadyBlue™ タンパク質ゲル染色試薬プロトコル
ReadyBlue™ タンパク質ゲル染色試薬は、ポリアクリルアミドゲル用の迅速かつ高感度なコロイド状クマシー染色液です。
- Brilliant Blue G – Colloidal Concentrate Protocol
Brilliant Blue G-Colloidal Concentrate stains proteins in IEF, PAGE, and SDS-PAGE gels after electrophoresis, enhancing sensitivity with protein fixation.
- タンパク質のウェスタンブロッティングの基礎
ウェスタンブロッティングでは、ゲル電気泳動によるタンパク質の分離、ポリフッ化ビニリデン(PVDF)またはニトロセルロースメンブレンへの転写、さまざまな方法による検出が行われます。
- DNA/タンパク質電気泳動およびトラブルシューティング表
DNAとタンパク質を含むゲル電気泳動(SDS-PAGE)アプリケーションのトラブルシューティングアガロースゲルでのDNA分離の有効範囲およびサンプルローディング色素のサイズ別移動度が確認できます。
- Protein Visualization
Prior to probing a membrane using precious antibodies, it is helpful to visualize the transferred proteins on the blot to ensure complete transfer and even loading. This page describes possible causes and potential remedies for challenges encountered during protein visualization.

