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MILLIPLEX® マルチプレックスアッセイとは?Luminex®マルチプレックスアッセイテクノロジーの概要

研究によって多くのバイオマーカーの重要な役割が明らかになるにつれて、高品質のアッセイと安定した性能を得るために、信頼できるパートナーが必要とされています。MILLIPLEX®マルチプレックスイムノアッセイは、Luminex® xMAP®マルチプレックスアッセイテクノロジーに基づくマルチプレックスバイオマーカーアッセイの最大のポートフォリオです。一貫した高品質の結果を提供することで、研究者が時間、労力、コストを削減しながら最善の仕事ができるようサポートします。これらのアッセイの利点と免疫学、がん、獣医学、代謝/内分泌学などの研究の発展にどのように活用されているかをご覧ください。

詳細はこちら

マルチプレックスアッセイとは?

マルチプレックスアッセイは、複数のアナライトの測定を1つのパネルにまとめたアッセイです。これらのアッセイは、ELISA(酵素結合免疫吸着検査法)などの1種類のアナライトを測定する分析法と比較して、ワークフローを改善することでサンプルの量と時間を節約できることから、人気が高まりました。

MILLIPLEX®マルチプレックスアッセイとその原理

MILLIPLEX®マルチプレックスアッセイは、独自のLuminex® xMAP®ビーズを用いたマルチプレックスアッセイプラットフォームを使用します。図1に、これらのアッセイの原理の図を示します。

Luminex®磁気ビーズとフィコエリスリン標識検出抗体を用いたLuminex®テクノロジーに基づくMILLIPLEX®マルチプレックスアッセイフォーマットの図。

図1.Luminex®テクノロジーに基づくMILLIPPLEX®マルチプレックスアッセイフォーマット

以下をクリックして、MILLIPLEX® マルチプレックスアッセイ手順で実施されるさまざまなステップの詳細な内訳をご覧ください。

Luminex<sup>®</sup> xMAP<sup>®</sup> ビーズを用いたマルチプレックスアッセイプラットフォームに基づくMILLIPLEX<sup>®</sup> マルチプレックスアッセイワークフローのキャプチャステップ。Luminex<sup>®</sup> MagPlex<sup>®</sup> ビーズに付着しているキャプチャ抗体に付着しているサンプルを示している。

キャプチャ(捕捉)

各MagPlex®磁性ビーズは、2つの蛍光色素の500種類の比率の1つで蛍光によりコードされています。スペクトルが異なる各セットは、ビーズ領域と呼ばれ、励起波長635 nmで蛍光を発します。アナライト特異的キャプチャ抗体を特定のビーズ領域のビーズに結合させます。次に、ビーズの未結合部位をブロックします。

A = サンプル、B = キャプチャ抗体、C = Luminex® MagPlex® ビーズ。

    Luminex<sup>®</sup> xMAP<sup>®</sup> ビーズを用いたマルチプレックスアッセイプラットフォームに基づくMILLIPLEX<sup>®</sup> マルチプレックスアッセイワークフローの検出ステップ。ビオチン化検出抗体に結合しているストレプトアビジン-フィコエリスリン(SAPE)を示している。

    インキュベーションと洗浄の後、アナライト特異的ビオチン化検出抗体カクテルを添加すると、それが結合して、サンドイッチ構造を形成します。ストレプトアビジン-フィコエリスリン(SAPE)を添加して、ビオチン化検出抗体に結合させます。

    A = ストレプトアビジン-フィコエリスリン、B = ビオチン化検出抗体。

      Luminex<sup>®</sup> xMAP<sup>®</sup> ビーズを用いたマルチプレックスアッセイプラットフォームに基づくMILLIPLEX<sup>®</sup> マルチプレックスアッセイワークフローの最終ステップ。xMAP<sup>®</sup> INTELLIFLEX<sup>®</sup> システムが示され、レーザーが説明されている。緑色レーザーは検出抗体を通過し、赤色レーザーはビーズを通過する。結合イベントを定量化するための緑色レーザー(532 nm)と、ビーズ領域を特定する赤色レーザー(635 nm)。

      プレートは、Luminex® システムで読み取ります。1つのレーザーがビーズ領域を特定し(アナライトの検出)、もう1つのレーザーがPE由来シグナルのスケールを特定します。

      A = 結合イベントを定量化するための緑色レーザー(532 nm)、B = ビーズ領域を特定するための赤色レーザー(635 nm)。

        Luminex®検出システムの原理

        Luminex®マルチプレックスプラットフォームには、xMAP® INTELLIFLEX® RUOとDR-SE、Luminex® 200、FLEXMAP3D®など、さまざまな検出システムがあります。これらのLuminex®システムは、ビーズがシース液中を流れてセルを通過する際に、ビーズ領域を同定する赤色レーザー(635 nm)と、結合したアナライトの「サンドウィッチ」を定量する緑色レーザー(532 nm)を用いる、フローサイトメトリーベースのシステムを使用しています。システムには、レーザー、光学系、流体工学、高速デジタルシグナル処理など、xMAP®の主要な検出コンポーネントが統合されています。

        個々のマイクロビーズは「ビーズシグネチャ」、つまりビーズ領域によって識別され、そのバイオアッセイの結果は蛍光レポーターシグナルに基づいて定量されます。Luminex®のデータ取得ソフトウェアとBelysa® Immunoassay Curve Fitting softwareの高度な解析機能を組み合わせ、すべてのLuminex®システムでデータの取得と解析をシームレスに統合します。Belysa® Immunoassay Curve Fitting softwareは、ほとんどのデータ取得パッケージにはない高度な機能を備えています。自動カーブフィッティング機能、データハイジーン規則、容易なデータ可視化およびスタンダードカーブの比較ツールが例として挙げられ、すべてのデータをさまざまなファイル形式でエクスポートできます。

        マルチプレックスビーズをサンプルに添加することにより、各サンプルから複数のアッセイ結果を得ることができます。オープンアーキテクチャーのxMAP®テクノロジーにより、多くの種類のバイオアッセイをマルチプレックス測定できるため、従来の方法に比べて時間、労力、コストを削減できます。

        Luminex®マルチプレックスプラットフォームの比較のページをご覧いただき、お客様の研究に適したプラットフォームをお探しください。

        MILLIPLEX®マルチプレックスアッセイを選択する理由

        MILLIPLEX®マルチプレックスアッセイには、複数のアナライトを同時に検出するために必要なすべての構成品と試薬が含まれており、多くの研究分野において、広範なキット、アナライト、動物種の製品を取り揃えています。以下のようなものがあります。

        • 130種類を超える血中可溶性タンパク質キット
        • 500種類を超える血中アナライト(異なる動物種は数えない)
        • 25種類を超える細胞シグナル伝達タンパク質のプレミックスマルチプレックスキットおよびシングルプレックスキット
        • 120種類を超える細胞シグナル伝達アナライト
        • ヒト、実験動物、コンパニオンアニマル、農業用動物を含む多数の動物種
        • 96および384ウェルフォーマット

        MILLIPLEX® キットには、クオリファイドアッセイとスクリーニングアッセイという目的に合わせた2つのアッセイソリューションもあります。

        クオリファイドアッセイ

        • ロット間再現性、厳格なQC検査
        • QCタンパク質およびSerum Matrixを含む
        • 長期試験または施設間の比較試験に最適
        • さまざまな研究分野と動物種に対応する極めて広範囲なアナライトを選択可能
        • 設定変更可能なキット、プレミックスキット、バルクキットのオプションによりお客様の正確な研究ニーズに対応

        スクリーニングアッセイ

        • 最大115種類のアナライトを同時に検討
        • クオリファイドアッセイと同じ試薬を使用(QCタンパク質およびSerum Matrixは含まない)
        • アナライトの特異性について試験
        • 試験群間のおよその差を特定するために最適
        • サンプルに依存しない
        • 利用できる種:ヒト

        マルチプレックスアッセイの利点は、時間、コスト、試薬、サンプルの節約など、多数あります。この幅広いポートフォリオによって、次のことが可能になります。

        • 必要なアナライトに対するアッセイを見つける
        • 1つのベンダーからアッセイを購入することで、より一貫性を高める
        • 現在と将来のニーズを満たす柔軟性を維持する
        • 動物モデルを用いた前臨床試験およびヒトサンプルを用いたトランスレーショナル研究において、1つのテクノロジーでバイオマーカーを定量する
        • 1つのテクノロジーを複数の研究分野で使用する
        • 目的のアナライトが特定された後に、スクリーニングアッセイからクオリファイドアッセイへシームレスに移行する

        さらに詳しいMILLIPLEX® マルチプレックスイムノアッセイの利点については、こちらの動画をご覧ください。 

        すべてのキットにおける品質

        キットの開発・検証から製造・品質管理に至るまで徹底追及したキットの品質によって、研究者は一貫した信頼性の高い結果を得ることができます。プロトコルに記載されたアッセイの仕様に加えて、私たちはキットの開発・検証プロセスにおいて、他の性能基準(交差反応性、希釈直線性、キット安定性、サンプル検出性およびサンプル安定性など)も評価しています。アッセイ性能とワークフローを念頭に置いてプロトコルを作成し、必要な情報を容易に見つけられるようにしています。スクリーニングアッセイとクオリファイドアッセイに適用される品質特性に関する詳細については、 高い品質を備えたMILLIPLEX®マルチプレックスキットのページをご覧ください。

        マルチプレックスアッセイカスタムサービス

        市販のマルチプレックスキットの中には、お客様の研究に必要なものがすべて揃っていないものもあるかと思います。これに対応するため、私たちはMILLIPLEX®マルチプレックスアッセイのカスタムサービスも提供しています。

        私たちのカスタムアッセイ開発サービスは以下をサポートします。

        • 新規アナライトの開発
        • 新規アナライトと既存アナライトを組み合わせてマルチプレックス
        • 2つ以上のパネルのアナライトを1つのカスタムパネルにまとめる
        • お客様のサンプルでアッセイをデザイン・検証
        • ロット間の再現性を確保するためのキットのブリッジング

        MILLIPLEX®マルチプレックスワークフロー

        MILLIPLEX®アッセイは、Luminex®マルチプレックスアッセイプラットフォームとシームレスに連携するため、測定と解析が容易にできます。また、Biotek®プレートウォッシャーなど、マルチプレックスワークフローを強化するための周辺機器も提供しています。

        MILLIPPLEX®キットには、Luminex®システムで測定するために必要なすべての試薬が含まれています。サンプルと水を用意するだけで測定できます。

        • 選択可能なキャプチャ抗体磁性ビーズ溶液
        • 簡単に溶解して連続希釈液を調製できる、プレミックスのスタンダードカクテル*
        • アッセイ性能を評価するための2種類のプレミックスのクオリティーコントロールカクテル(QC)
        • パネル内で一貫したアナライトプロファイルが得られるようにデザインされたプレミックスの検出抗体カクテル
        • 最適濃度に希釈済みのストレプトアビジン-フィコエリスリン(SAPE)
        • 血清または血漿サンプルで検証済みのキットには、本来のサンプル環境を模倣するために、最適化されたSerum Matrixが含まれています
        • アッセイにおいて抗体への非特異的結合を軽減させるための独自のブロッキング試薬を含むBead Diluent
        • キットに最適化された10X Wash BufferおよびAssay Buffer
        • 96ウェルまたは384ウェルプレート(アッセイフォーマットによる)と2枚のプレートシーラー

        *クオリファイドキットにはスタンダードバイアルが1本、スクリーニングキットには最大7本含まれている可能性があります。
        スクリーニングキットには含まれません。
        プレミックスビーズの入ったキットには含まれません。Bead Diluentでは、プレミックスビーズがすでに使用濃度に調製されています。

        注記:MILLIPLEX®細胞シグナル伝達キットは、細胞ライセートサンプルの使用に対応するための別のフォーマットがあります。

        注記:MILLIPLEX®抗体検出キットには、血清および血漿サンプル中の抗体を測定するための別のフォーマットがあります。

        研究分野

        マルチプレックスイムノアッセイは、疾患のメカニズムやプロセスについてより全体像を示すことができるため、さまざまな研究分野において非常に有用です。MILLIPLEX®マルチプレックスアッセイは以下の研究分野において使用されています。

        MILLIPLEX®アッセイのヒントとコツ

        MILLIPLEX®アッセイの実施についてご質問がある場合は、こちらの資料をご確認ください。

        関連ウェビナー

        MILLIPLEX®アッセイを使用した文献

        毎年、何千人もの研究者がMILLPLEX®キットの恩恵を受け、世界中の科学雑誌にその成果を発表しています。研究分野別に注目の高い最近の発表を以下に示します。研究者たちがMILLPLEX®アッセイをどのように使用しているのか、ご覧ください。

        さらに興味がありますか?メルクの高感度イムノアッセイの能力については、SMC® テクノロジーの概要のページをご覧ください。

        関連製品

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        研究目的での使用に限定されます。診断目的には使用できません。

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