발열원 검사 방법

엔도톡신은 그람 음성균에서 발견되는 물질입니다. 비엔도톡신 발열원은 그람 양성균, 바이러스, 효모 및 곰팡이에서 유래한 물질을 포함하여 그 밖의 미생물성 물질입니다. 비미생물성 발열원 물질은 고무 입자, 미세한 플라스틱 입자 또는 엘라스토머 내의 금속 화합물에서도 발생할 수 있습니다.

발열원을 검출하기 위한 여러 가지 시험 방법이 있습니다. 이러한 시험 방법은 검출 대상 오염 물질의 유형과 시험 수행 시 동물성 재료의 필요 여부에 따라 아래 표와 같이 분류할 수 있습니다:

토끼 발열원 시험

토끼 발열원 검사(RPT)는 시험 대상 제품을 토끼에게 정맥 주사한 후 발생하는 체온 상승을 측정하는 방법입니다. RPT는 정성적 결과를 제공하며 민감도가 상당히 낮습니다. 또한 반복적인 주사로 인해 토끼에게 발열원 내성이 생기거나, 검사 수행 시 토끼가 받는 스트레스로 인해 이 검사의 신뢰성도 제한적입니다.

참고: 현재 유럽에서는 토끼 발열원 시험(RPT)이 금지되어 있으며, 내독소 및 비내독소 발열원을 모두 검출하기 위한 권장 방법은 단핵구 활성화 시험(MAT)입니다.

단핵구 활성화 시험

단핵구 활성화 검사(MAT)는 내독소 및 비내독소 발열원을 검출하기 위한 동물 기반 방법의 대안입니다. 단핵구 활성화 검사는 단핵구를 시험 시료와 함께 배양함으로써 인체의 면역 반응을 모방합니다. 발열원이 존재할 경우, 단핵구가 활성화되어 발열 반응을 유발하는 염증성 분자인 사이토카인을 생성합니다. 이후 특정 항체와 효소 색반응을 이용한 면역학적 분석법(ELISA)을 통해 사이토카인을 검출합니다. 

참고: 2025년 7월 현재, 유럽 약전(Ph. Eur.) 위원회는 내독소 및 비내독소 발열원 검사에 있어 단핵구 활성화 검사(MAT)를 우선적인 방법으로 사용할 것을 권장하고 있습니다. 토끼 발열원 검사(RPT)는 현재 유럽에서 사용이 금지되었습니다.

이 기사를 읽고 당사의 전문가들과 더 자세히 논의하여, 엔도톡신 및 비엔도톡신 발열원을 검출하는 MAT로 전환하고 규제 동향을 따르시기 바랍니다. 

세균성 내독소 검사(LAL 검사)

엔도톡신 검사에 가장 널리 사용되는 방법은 리뮬루스 아메보사이트 용해물 검사(LAL 검사)로, 말발굽게 혈액의 아메보사이트 용해물을 기반으로 한 분석법입니다. 말발굽게 혈액 세포의 용해물은 응고 반응을 통해 세균성 엔도톡신과 자연적으로 반응합니다. 이 방법은 엔도톡신 정량에 있어 높은 민감도를 보이지만, 비엔도톡신 발열원은 검출하지 못합니다.

재조합 BET(r-FC, r-CR) 검사

재조합 인자 C(Factor C)는 리뮬루스 아메보사이트 용해물 캐스케이드에서 정상적으로 발견되는 유전자 조작 단백질입니다. 이 검사에서 인자 C는 내독소와 반응하여 마커와 결합함으로써 정량 가능한 형광 최종 생성물을 생성합니다. 재조합 인자 C 검사는 LAL 검사와 동일한 원리를 사용하지만, 동물 유래 물질이 필요하지 않습니다. 

재조합 캐스케이드 시약(r-CR)은 리뮬루스 아메보사이트 용해물에서 발견되는 완전한 응고 캐스케이드를 재현하는 유전자 조작 다성분 시약입니다. 이 검사에서 캐스케이드 단백질인 인자 C, 인자 B 및 전응고 효소는 엔도톡신과 순차적으로 반응하여 정량 가능한 최종 생성물을 생성합니다. r-CR 검사는 동물 유래 물질을 사용할 필요 없이 전체 LAL 경로를 재현합니다.