コラゲナーゼB

コラゲナーゼBは、 Clostridium histolyticum 培養物をろ過、硫酸アンモニウム沈殿、透析、および凍結乾燥することにより調製されます。 Clostridium histolyticum 由来コラゲナーゼは、コラーゲン分解酵素です。コラーゲン様物質と相互作用し、コラーゲンの小さなペプチドへの分解に関与します。 さまざまな組織（例えば、肺、心臓、筋肉、骨、脂肪組織、肝臓、腎臓、軟骨、乳腺、胎盤、血管、脳、腫瘍）の脱凝集および初代培養細胞システムを確立させるための単細胞浮遊液の調製に広く使用されます。コラゲナーゼBは、収量および生存能が重要な場合に推奨されます。

ロシュのClostridiumコラゲナーゼは、肝細胞、脂肪細胞、膵島、上皮細胞、筋肉細胞、内皮細胞などさまざまな組織から細胞を調製するために使用されています。しかし、酵素の各ロットが特定の組織の破壊に適しているかは、実験的に決定する必要があります。
コラゲナーゼBは、マウス大動脈および結腸直腸癌組織由来細胞の調製に使用されています。

コラゲナーゼは天然コラーゲンを分解します。トリプシン様酵素であるクロストリパインおよび中性プロテアーゼは他のタンパク質も同様に分解します。

酵素活性：
コラゲナーゼ活性：> 0.15U/mg（Wünschによる）（+25°C、4-フェニル-アゾベンジル-オキシカルボニル-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Argを基質とする）
汚染酵素活性：トリプシン、クロストリパイン、および総タンパク質分解活性
コラゲナーゼBは、正常～高値のコラゲナーゼ活性と、平均超のクロストリパイン活性（通常>10U / mg）を示します。

インヒビター：
コラゲナーゼインヒビター：EDTA、EGTA、Cys、His、DTT、2-メルカプトエタノール
コラゲナーゼは血清で阻害されません。
クロストリパインインヒビター：TLCK
トリプシンインヒビター：アプロチニン、トリプシンインヒビター（卵白、ダイズ）、血清

アクチベーター： Ca²⁺
作業濃度： 0.5～ 2.5 mg /mL
保存条件（標準溶液）： -15～-25 °C
ロシュは、即時使用に必要な量の凍結乾燥物のみを溶解することを推奨します。溶解した溶液は、-15〜-25°Cで1週間まで保存できます。溶解後は活性が低下するため、凍結と解凍を繰り返すことは避けてください。

平衡状態のいずれの塩にも再溶解できます（たとえばHBSS）

ライフサイエンス研究専用。診断目的での使用はできません。

ロシュのコラゲナーゼは、Wünsch単位（Wünsch 基質を用い+ 25°Cにおいて1分あたり製品1μmolを生成）で測定します。
多くの場合、コラゲナーゼ活性はMandl単位（+37°Cにおいて5時間で1μmolのロイシンがコラーゲンから遊離）で示されます。
残念ながら、Mandl単位はコラゲナーゼ調製物中の混入プロテアーゼの濃度に部分的に依存し、これが定義できない変量となることから、この2つの活性単位の間に一貫した変換係数はありません。より純度の高いコラゲナーゼ調製物は、粗調製物に比べMandl単位で示す特異的活性は実際に低くなります。Clostridium調製物には、一般に約1:1800の変換係数があります（たとえば、Clostridiumコラゲナーゼの特定のロットには、約 0.15 Wünsch U/mg および250 Mandl U/mgが含まれています）。