SP6 RNA ポリメラーゼ

このシステムにより、均一に標識化された単鎖RNA を生成することができます。転写は、ビオチンまたはDIG-11-UTPで非放射性の標識化を行うか、[α-³²P]または [α-³⁵S]で標識化されたヌクレオチドにより高度な特定活性まで放射性の標識化を行うことができます。

含有量:

• SP6 RNAポリメラーゼ、≥20 U/μl、緩衝液中でpH7.9
• 転写緩衝液、10倍濃度

SP6 RNAポリメラーゼは、SP6プロモーターの下流であるクローンされたDNAテンプレートからRNAを転写します。標識化NTPによる合成により、高度標識化RNAを生成することができます。合成されたRNAは、以下の多くのアプリケーションで使用することができます：

• RNAまたはDNAブロッティング技術
• In situハイブリダイゼーション
• RNase保護の研究：酵素によって合成された転写物は、RNAの切り貼りおよび処理の研究用の前駆物質RNAとして使用されます。
• 転写反応中に、過剰なm7GpppGまたはm7GpppAをGTPまたはATPに付加することによるin vitroなキャップ化RNAの合成。生成されたアンチセンスRNAを細胞に導入して、対応する遺伝子の発現を抑制することができます。
• アンチセンスRNAプローブの合成

プロモーター特異性

SP6 RNAポリメラーゼは極めてプロモーター特異的であり、バクテリオファージSP6 DNAまたは SP6プロモーター（例えば、 pSPTBM20; pSPTBM21）の下流でクローン化されたDNAのみを転写します。

熱による不活性化：2μl 0.2 M EDTA (pH8.0)の添加および／または65°Cの加熱により、反応は停止します。

ハイブリダイゼーションプローブの合成SP6 RNAポリメラーゼにより、均一に標識化されたRNAの高効率な生産が可能になります。この標識化されたRNAは、サザンブロット、ノーザンブロット、ドットブロット、ならびにin situハイブリダイゼーションで使用されます。
適切な標識：転写物は、ビオチン-16-UTP、DIG-11-UTP、またはフルオレセイン-12-UTPで非放射性的に標識化することができます。転写物は、[a-³²P]または[a-³⁵S]で標識化されたヌクレオチド

により、高度特定活性まで非放射性的に標識化することもできます。注記：Roche社は、DIG-、ビオチン、およびフルオレセイン標識化用の特別仕様の10倍濃縮RNA標識化混合液を提供します。これらの混合液は、SP6 RNAポリメラーゼによく作用します。

活性化因子: BSA/スペルミン

容器を密閉し、乾燥した換気の良い場所で保管してください

試験緩衝剤
40 mM Tris-HCl、pH8.0 (+20°C)、6 mM MgCl₂、10 mMジチオスレイトール、2 mM スペルミジン、pH約8.0 (+20°C)。
エンドヌクレアーゼの不在
1.1μgラムダDNAは、SP6 RNAポリメラーゼと共に+37°Cで4時間にわたり、25μl試験緩衝剤中で保温します。ラムダDNAの劣化を示さないユニットの数は、>　30 Uです。
2.ラムダDNAの1μg Eco RI/Hind III断片は、SP6 RNAポリメラーゼと共に、+37°Cで4時間にわたり25μl試験緩衝剤中で保温します。横縞模様の変化を示さないユニットの数は、> 30 Uです。
ニッキング活性の不在
1μg pBR322 DNAはSP6 RNAポリメラーゼと共に+37°Cで4時間にわたり25μl試験緩衝剤中で保温します。高次コイル構造の緩和を示さないユニットの数は、> 30です。
RNasesの不在
4μg MS2 RNAは、SP6 RNAポリメラーゼと共に+37°Cで4時間にわたり50μl試験緩衝剤中で保温します。MS2 RNAの劣化を示さないユニットの数は、> 30です。
転写分析の結果
SP6 RNAポリメラーゼは、SP6/T7 Transcription Kit (Cat.No. 10 999 644 001)で官能検査されます。Eco RIおよび50 mCi [alpha-³²P] CTP, [400 Ci/mmol (15 TBq/mmol)] で直線化された0.5μg pST18ネオDNAによる標準分析における取り込み速度は、20分間で入力放射能の>50%です。

一単位は、+37°Cにおいて60分間で酸不溶性RNA製品中に1nmolCMPを取り込む酵素活性です。

体積活性：≥20 U/μl

生命科学研究用途に限ります。診断措置において使用しないでください。