Medios de separación celular para aplicaciones experimentales, de diagnóstico y farmacéuticas

SEPARACIÓN CELULAR CON MEDIOS ACCUSPIN™ SYSTEM-HISTOPAQUE^®

El popular sistema ACCUSPIN™ con Histopaque^®-1077 utiliza tubos de centrífuga esterilizados por radiación diseñados para crear dos cámaras separadas con una barrera porosa de polietileno de alta densidad («frita»). Este sistema permite añadir sangre completa anticoagulada a la cámara superior sin riesgo de que se mezcle con el medio de separación Histopaque^® en la cámara inferior. Los medios de grado de densidad Histopaque^® permiten una separación clara de linfocitos y células mononucleares (es decir, monocitos). Los eritrocitos se agregan y los granulocitos se vuelven ligeramente hipertónicos, lo que aumenta su velocidad de sedimentación y hace que sedimenten en la parte inferior del tubo ACCUSPIN™. Una vez completado el proceso de separación, las células aisladas pueden caracterizarse, cultivarse, analizarse o utilizarse en aplicaciones posteriores como la citometría de flujo, los análisis en células aisladas, los análisis moleculares, y el desarrollo de tratamientos farmacéuticos o citoterapias.

MEDIOS YODADOS DE GRADIENTE HISTOPAQUE^®

Los medios Histopaque^® están diseñados para separar diferentes tipos de células en función de su densidad y suelen utilizarse en la investigación farmacéutica y biomédica para el aislamiento y la purificación de poblaciones celulares específicas. Los medios Histopaque^® son disoluciones de polisacarosa y diatrizoato de sodio, esterilizadas por filtración y comprobadas para endotoxinas,, ajustadas a densidades precisas. Estos medios de separación listos para usar facilitan la recuperación rápida y óptima de las células viables de pequeños volúmenes de sangre. Los medios de separación Histopaque^® suelen utilizarse en aplicaciones como el aislamiento de células mononucleares de sangre periférica (PBMC). Los medios Histopaque^® se emplean a menudo para aislar las PBMC de muestras de sangre completa. Las PBMC consisten en linfocitos, monocitos y otras células nucleadas. Al colocar capas del medio Histopaque^® entre la muestra de sangre y un tubo de centrífuga, la centrifugación provoca la separación de las PBMC de los otros componentes sanguíneos, como los glóbulos rojos y las plaquetas. Fraccionamiento celular: los medios Histopaque^® pueden utilizarse para fraccionar las poblaciones de células mixtas en distintas capas en función de su densidad. Al colocar el medio de separación en capas en un tubo de centrífuga y agregar con cuidado la suspensión celular, la centrifugación provoca la formación de capas nítidas que representan diferentes tipos de células. Esta técnica es útil para separar y purificar las células para su posterior análisis o experimentación. Aislamiento de tipos específicos de células: los medios de separación Histopaque^® se pueden utilizar para aislar poblaciones celulares específicas en función de su densidad o de marcadores específicos. Al colocar con cuidado el medio de separación y la suspensión celular, la centrifugación separa las células de interés de las células no deseadas. Esta técnica es particularmente valiosa para los investigadores que estudian tipos específicos de células o que buscan enriquecer poblaciones de células raras. Los productos Histopaque^®, fabricados bajo la norma de calidad ISO 9001, con pruebas de rendimiento específicas de cada lote, proporcionan una separación selectiva uniforme de las líneas celulares sanguíneas, una separación óptima de las células viables no distorsionadas y una mínima interferencia de células extrañas.

MEDIOS DE SÍLICE COLOIDAL PERCOLL^®

Los medios de sílice coloidal son suspensiones coloidales de partículas de sílice, con un diámetro de 15-30 nm, recubiertas con polivinilpirrolidona (PVP), que se suelen utilizar en la investigación biomédica y farmacéutica para la separación y purificación celulares. La PVP disminuye las interacciones de las partículas con el material biológico y estabiliza el coloide en una disolución salina isotónica. Su densidad se puede ajustar cambiando la concentración de la disolución Percoll^®, lo que permite a los investigadores personalizar el gradiente para que se adapte a sus requisitos de separación específicos. Nuestros medios coloidales Percoll^® tienen una resistencia osmótica extremadamente baja, poco variable con la densidad. Además, la osmolalidad de los gradientes formados por centrifugación se ajusta fácilmente añadiendo la cantidad adecuada de sacarosa o disolución tampón. Los gradientes Percoll^® son ideales para las separaciones isopícnicas de células, orgánulos, vesículas de membrana e incluso algunos virus.

SALES INORGÁNICAS

Los medios de gradiente iónico, también conocidos como gradientes iónicos o disoluciones iónicas, se utilizan en técnicas de separación celular para separar las células en función de su carga de superficie o sus propiedades eléctricas. Estos medios crean un campo electrostático o un diferencial de carga, que permite la separación de células con diferentes cargas de superficie. Ejemplos de técnicas de separación celular en las que se utilizan medios de gradiente iónico son la electroforesis, la dielectroforesis (DEP) y el enfoque isoeléctrico (IEF). La elección específica de los medios y la técnica depende de la naturaleza de las células que se quieran separar, el mecanismo de separación deseado y los objetivos experimentales generales. Nuestros medios de gradiente iónico, compuestos por sales de metales pesados concentradas, se utilizan exclusivamente para separaciones isopícnicas de los ácidos nucleicos. El cloruro de cesio y el sulfato de cesio son las sales metálicas pesadas más utilizadas con densidades de gradiente de hasta 1,91 g/cm³. Otras sales empleadas son el yoduro de sodio, el bromuro de sodio y las sales de rubidio. La selección y el diseño de medios y técnicas de gradiente iónico requieren una cuidada consideración de factores como el pH, la conductividad, la composición de la disolución tampón y las propiedades eléctricas de las células que se estén investigando.

MEDIOS DE GRADIENTE DE DENSIDAD YODADOS NO IÓNICOS

Los medios de gradiente de densidad yodados no iónicos son sustancias especializadas utilizadas para técnicas de separación y purificación en varios campos, entre ellos, la biología, la bioquímica y el diagnóstico clínico. Estos medios se basan normalmente en compuestos yodados que forman gradientes de densidad, permitiendo la separación de partículas en función de su densidad. Los medios de gradiente de densidad yodados no iónicos operan según el principio de centrifugación por gradiente de densidad. Las estructuras de la mayoría de los compuestos yodados utilizados en los medios de gradiente de densidad populares se basan en compuestos yodados, como el ácido triyodobenzoico con un grupo hidrófilo unido para aumentar su solubilidad con el fin de formar un gradiente de densidad continuo en disolución acuosa. Proporcionamos disoluciones de iohexol más densas (por ejemplo, Nycodenz^® e Histodenz™) que reducen la deshidratación de las partículas biológicas al mínimo. El iohexol no es tóxico y no es metabolizado por las células de mamíferos.

ALCOHOLES POLIHÍDRICOS

Nuestra cartera de medios de gradiente no iónicos compuestos por alcohol polihídrico consta de gradientes de sacarosa que se utilizan ampliamente para la separación zonal de macromoléculas y para la separación isopícnica de virus y orgánulos celulares. Entre sus ventajas se cuentan su naturaleza estable, su inercia y su bajo coste; mientras que las desventajas implican la naturaleza concentrada e hipertónica de la disolución. También ofrecemos una disolución de glicerol con menor densidad que las disoluciones de sacarosa correspondientes, evitando así la actividad de ciertas enzimas mientras se eliminan fácilmente con vacío.

POLISACÁRIDOS

Proporcionamos el medio de polisacáridos más utilizado, Ficoll^®, para esquivar los problemas de alta resistencia osmótica que surgen con el uso de disoluciones de sacarosa. Los polímeros sintéticos Ficoll^® consisten en poli(etilenglicol) (PEG) recubierto de polivinilpirrolidona utilizados habitualmente para preparar disoluciones de gradiente de densidad. Las disoluciones Ficoll^® se utilizan mucho en diversas aplicaciones biológicas y bioquímicas, en particular para la separación y el aislamiento de células. La disolución se produce por la polimerización de moléculas de sacarosa con epiclorohidrina para dar un polisacárido con un peso molecular promedio de 400 000. Las disoluciones de Ficoll^® inferiores al 20% (p/v) tienen una densidad de 1,07 g/cm3 y se consideran osmóticamente inertes. La principal desventaja de la disolución Ficoll^® reside en su naturaleza más viscosa que las disoluciones de sacarosa comparables. Las disoluciones Ficoll^® desempeñan un papel significativo en varios procesos de investigación y desarrollo farmacéuticos, facilitando el aislamiento, la purificación y la caracterización de células, virus y otros componentes biológicos, y contribuyendo así a los avances en el descubrimiento de medicamentos, la inmunoterapia y otras aplicaciones farmacéuticas. Se emplean habitualmente en técnicas de separación celular, especialmente para aislar células mononucleares de sangre periférica u otras fuentes celulares. Al colocar la suspensión celular en un gradiente de densidad Ficoll^® y centrifugar, las células de interés, como los linfocitos o los monocitos, pueden separarse de otros tipos de células y de componentes no deseados como los glóbulos rojos y los granulocitos. Las disoluciones Ficoll^® también se utilizan en la centrifugación en gradiente de densidad, una técnica que separa partículas o moléculas en función de su densidad de flotación. Durante la centrifugación, las partículas o las células migran a través del gradiente de Ficoll^® y se asientan en posiciones que corresponden a sus respectivas densidades. Esto permite la separación y el fraccionamiento de diferentes componentes presentes en una mezcla heterogénea.