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Endonucleasa

Endonucleasa

Las enzimas endonucleasas se utilizan para reducir el nivel de contaminación por ácidos nucleicos en los flujos de trabajo de bioprocesamiento y en aplicaciones de investigación, mediante la escisión del ADN y el ARN en fragmentos más pequeños. Aunque existe una amplia variedad de fuentes naturales disponibles, estas formulaciones de endonucleasas pueden suponer un reto, ya que pueden contener actividad proteásica y contaminantes virales. La endonucleasa Benzonase®, una nucleasa modificada genéticamente procedente de Serratia marcescens, elimina el riesgo asociado al uso de endonucleasas de origen natural y es capaz de degradar todas las formas de ADN y ARN.

Solicitar una muestra

Cuando se utiliza en condiciones de reacción adecuadas, la endonucleasa Benzonase® degrada todas las formas de ADN y ARN (monocatenario, bicatenario, lineal y circular) en oligonucleótidos de entre tres y cinco pares de bases de longitud aproximadamente. Presenta un nivel excepcionalmente alto de actividad específica sin ninguna actividad proteolítica detectable.

Con algunas plantillas de fabricación, puede resultar beneficioso utilizar una concentración de sal superior a los niveles fisiológicos (200 mM de NaCl). La endonucleasa Benzonase® tolerante a la sal permite utilizar concentraciones de sal de entre 200 mM y 1000 mM de NaCl para la lisis intermedia y la etapa de digestión del ADN durante la producción de vectores de virus adenoasociados (AAV). Esta nueva incorporación a la gama Benzonase® es compatible con todos los detergentes probados, incluidos los detergentes Deviron®, que constituyen una alternativa al Triton™ X-100.

Aplicaciones
en bioprocesamiento

La endonucleasa Benzonase® es idónea para aplicaciones de bioprocesamiento exigentes. Degrada los ácidos nucleicos a fragmentos de tamaño muy inferior a los 200 pares de bases exigidos por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. (FDA), se comercializa bajo condiciones GMP IPE-PQG y cuenta con un expediente maestro de fármaco (Drug Master File) registrado en la FDA que puede citarse en las solicitudes reglamentarias.

Es eficaz en una amplia gama de condiciones de funcionamiento y aplicaciones, entre las que se incluyen:

  • Purificación de vacunas virales y vacunas de vectores virales
  • Purificación de terapias celulares y génicas
  • Purificación de virus oncolíticos
  • Eliminación de ADN y ARN de proteínas y otros productos biológicos
  • Eliminación del ADN de la célula huésped

Hay disponibles tres versiones de la endonucleasa IPEG PQG GMP Benzonase® para satisfacer diferentes necesidades de fabricación. Todas ellas forman parte del programa Emprove®, que facilita la preparación de la documentación para las solicitudes reglamentarias (Tabla 1).

Las endonucleasas Benzonase® se producen en el sistema de expresión de E. coli W3110 y presentan un riesgo mínimo de contaminación viral.

  • Endonucleasa Benzonase® Emprove® Expert
  • La endonucleasa Benzonase® Safety Plus Emprove® Expert se produce en un medio químicamente definido y cada lote se somete a pruebas para garantizar la ausencia de virus adventicios y micoplasmas.
  • La endonucleasa Benzonase® Salt Tolerant también se produce en un medio químicamente definido y cada lote se somete a pruebas para detectar la presencia de micoplasmas; se ofrecen pruebas de detección de virus adventicios bajo demanda.


Aplicaciones de investigación

La endonucleasa Benzonase® puede utilizarse para diversas aplicaciones de investigación, entre las que se incluyen:

  • La eliminación del ADN del huésped de muestras de microbioma
  • Mejora de la identificación de taxones microbianos para estudios del microbioma
  • Prevención de la aglutinación durante la investigación sobre vacunas
  • Reducción de la viscosidad del lisado durante los procesos de extracción de proteínas recombinantes, lo que permite mejorar el rendimiento de la proteína diana

Hay disponibles diversas opciones de endonucleasa Benzonase® de alta pureza y alta concentración.

La endonucleasa Benzonase® también se ofrece en un kit junto con reactivos de extracción de proteínas para facilitar aún más los procesos.

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