Procesamiento de vectores virales
Históricamente, los procesos de purificación de vectores virales se han basado en sistemas utilizados para anticuerpos monoclonales, que no están diseñados para ofrecer el nivel necesario de recuperación.
La introducción de nuevas tecnologías diseñadas específicamente para el procesamiento posterior de vectores virales de terapia génica ofrece la oportunidad de aumentar el rendimiento y la producción. Entre los enfoques que pueden aprovecharse para optimizar el procesamiento posterior de vectores virales se incluyen:
- Ultrafiltración/diafiltración.Operaciones de ultrafiltración/diafiltración, en particular con el uso de la filtración de flujo tangencial (TFF) para la recolección y purificación celular o vírica, la concentración de proteínas aguas abajo y la diafiltración, así como en la formulación final./li>
- Intensificación de procesos de cromatografía que reducen el número y el tamaño de las operaciones unitarias, mediante tecnologías como los adsorbedores de membrana de cromatografía de alta productividad y de un solo uso
Estas tecnologías posteriores ofrecen la posibilidad de reducir el tiempo de purificación de vectores virales de horas a minutos, al tiempo que mejoran la recuperación. Además, pueden facilitar la ampliación, reducir la huella del proceso y permitir una utilización más eficiente de las instalaciones.
Clarificación primaria
El medio crudo que contiene vectores virales se somete a una filtración en profundidad o a una combinación de centrifugación y filtración en profundidad para eliminar los restos celulares grandes y otros contaminantes.
Clarificación secundaria
El medio clarificado a partir de la clarificación primaria se purifica aún más a través de pasos adicionales.
Ultrafiltración/Diafiltración
La ultrafiltración y la diafiltración se utilizan para la concentración y el intercambio tampón, respectivamente. El vector viral se separa de las impurezas mediante filtración basada en el tamaño. La diafiltración elimina la sal y otras moléculas, sustituyéndolas por el tampón de elección.
Cromatografía
Para purificar el vector viral se utilizan al menos dos métodos de cromatografía, incluyendo el intercambio iónico, la afinidad y la exclusión por tamaño.
Filtración viral
El vector viral purificado se somete a nanofiltración con poros de 15 nanómetros para eliminar virus adventicios, endotoxinas y cualquier otra impureza y agregado restante.
Filtración estéril
La filtración estéril, o reducción de la carga biológica, puede utilizarse varias veces en el proceso. El flujo de alimentación pasa a través de un filtro de grado de esterilización de 0,4 o 0,2 micras para eliminar las bacterias y otros microorganismos que se hayan introducido durante el procesamiento.
Llenado final
El vector viral purificado y estéril se llena en el recipiente final previsto. Aquí hay que tener muy en cuenta la formulación, los materiales de envasado y las condiciones de almacenamiento para garantizar la estabilidad y la integridad.
El vector viral purificado y estéril se envasa en el recipiente final previsto.
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