Inhibiteur de trypsine from Glycine max (soybean)

Un mg d′inhibiteur de trypsine permet d′inhiber 1,0-3,0 mg de trypsine d′une activité d′environ 10 000 unités de BAEE par mg de protéine.

Ce produit a été testé pour les applications de culture cellulaire. La trypsine a été utilisée dans une étude évaluant l′application potentielle en culture de cellules animales d′une protéase alcaline provenant d′un isolat de Vibrio sp. V26 non toxigène issu de mangroves. Elle a également été utilisée dans une étude visant à améliorer la détection des champignons dans la mucine éosinophilique

Cet inhibiteur agit contre la trypsine ; il présente une activité réduite envers la chymotrypsine et la plasmine. Il inhibe également les protéases dont le mécanisme est similaire à celui de la trypsine, la kallikréine plasmatique et le facteur de coagulation X. L′inhibiteur de trypsine n′agit pas contre les métalloprotéases, les kallikréines tissulaires, les protéases acides ou les thio-protéases. Cet inhibiteur agit en formant un complexe d′une façon stœchiométrique 1 à 1 avec le site actif de la protéase, suivi du clivage d′une seule liaison arginine-isoleucine présente dans l′inhibiteur. L′inhibition est réversible et dépendante du pH.

L′inhibiteur de trypsine dérivé du soja est une protéine monomère constituée de 181 acides aminés formant une chaîne polypeptidique unique comportant deux ponts disulfures.

Une unité de trypsine produit une ΔA₂₅₃ de 0,001 par minute à pH 7,6 et 25 °C avec le substrat BAEE, dans un volume de réaction de 3,2 ml et un trajet optique de 1 cm.

Une unité de trypsine produit une A₂₅₃ de 0,001 par minute avec l′ester éthylique de N-alpha-benzoyl-L-arginine (BAEE) comme substrat à pH 7,6 et 25 °C.

L′inhibiteur de trypsine est soluble dans l′eau et les tampons phosphate à 10 mg/ml. Il est soluble dans des solutions salines équilibrées à 1 mg/ml et dans les milieux sans sérum. Les solutions d′une concentration supérieure à 10 mg/ml peuvent être troubles et de couleur jaune à ambrée. Après le traitement des cellules à la trypsine, les resuspendre dans une solution d′inhibiteur de trypsine à 1 mg/ml pour chaque ml de solution de trypsine utilisée pour la dissociation. La suspension cellulaire doit alors être centrifugée à 1000 tr/min pour former un culot de cellules.

Les solutions maintiennent leur activité lorsqu′elles sont conservées à court terme entre 2 et 8 °C. Les solutions sont stables en aliquotes congelés à -20 °C.