トランスクリプターワンステップRT-PCRキット

トランスクリプターワンステップRT-PCRキットは、便利なフォーマットでワンステップRT-PCR(プライマーとテンプレートを除く)に必要なすべての構成要素を提供しています。50反応のパックサイズは、10回分のコントロール反応(コントロールRNAとコントロールプライマーミックス)も含んでいます。
キットのRT-PCR酵素ミックスは、4種の異なる酵素を含んでいます:トランスクリプター リバーストランスクリプターゼは、高収率で感度が高く頑健な逆転写を保証します；Protector RNase Inhibitorは、高温で完全に活性化し、逆転写中にテンプレートを最大に保護します；Expand Systemは、Taq DNAポリメラーゼと校正ポリメラーゼからなるブレンドであり、変異の可能性を最小化し、PCRの高収率と忠実性を提供します。
最適化RT-PCRリアクションバッファーは、高品質dNTPを含み、ホットスタートシステムの全体的なパフォーマンスの向上を提供します。バッファーの独自のホットスタート成分は、プライマーを非特異的サイトに結合せずに低温でプライマーを結合し隔離します。別の成分は、温度依存的な方法で、マグネシウムと結合し、無制限なDNA合成をさせないようにします。この新しいバッファ処方は、逆転写もPCRも効果的であり、特異性と感度を高めることにつながります。
最適な反応バッファと酵素ミックスの組みあわせは、反応温度を上げずに、高い二次構造とGC含有量で異なるテンプレートの効果的な転写を保証します。

ホットスタートワンステップRT-PCRに対して、革新的なホットスタートバッファー（特許出願中）でトランスクリプター リバーストランスクリプターゼ、Protector RNase Inhibitor、Expand Systemの酵素ミックスを活用します。

ワンステップRT-PCRは、RNAテンプレートの有無を決定、あるいは、RNA転写レベルの定性的、半定量的、定量的分析を通した発現レベルの定量（例えば、ウィルスレベル定量化）のための非常に感度の高い技術です。このRT-PCR法は、クローニングのための稀少なmRNAの増幅も促進します。ワンステップフォーマットは簡便で、反応間の変異を削減し、実際に操作する工程を最小化することでコンタミを防ぎます。
トランスクリプターワンステップRT-PCRキットは、トランスクリプターリバーストランスクリプターゼの極めて優れた利点、およびホットスタートワンステップRT-PCRフォーマットの長所をもたらします。

トランスクリプターワンステップRT-PCRキットは、遺伝子特異的プライマーを用いて、RNA(総RNA, mRNA, in vitro-転写RNA, or viral RNA)の迅速で感度の高い、特異的エンドポイントRT-PCR分析に対して設計されています。
革新的なリアクションバッファーに注目すると、このキットは、感度が高く、高収率の逆転写を、高い忠実性と高収量のGCリッチRNAを含む多様なテンプレートの増幅のためのホットスタートシステムをパフォーマンスの向上に結びつけました。
このキットは、

• RNA転写レベルの定性、半定量または定量分析
• RNAテンプレートの有無の決定
• RNA分析を通した遺伝子発現の定量（例えば、ウィルスレベル定量化）
• 最大6.5 kbのRNAクローニング

などの最大6.5kbの転写を行う便利で高感度のワンステップRT-PCR法を提供します。ワンステップフォーマットは、便利で、反応間の変異を削減し、実際に操作する工程を最小化することでコンタミを防ぎます。

Transcriptor One-Step RT-PCR Kitは、以下の増幅に使用されています。

• C型肝炎ウイルス（HCV）のフラグメント
• 重鎖CH3領域および軽鎖polyA領域
• マウス白血病ウイルス（MLV）

• 幅広い増幅範囲での高い感度と収量を獲得します。

総RNA量わずか1fgを検出します。

• 高い選択性を達成し、プライマーダイマーの形成を減らします。

このキット独自のホットスタートバッファー（特許出願中）で非常に高いパフォーマンスが期待されます。

• 長いフラグメントを産生します。

最大6.5kbの転写産物を生成します。

• さまざまなテンプレートを逆転写可能です。最も困難な試料（例えば、GCリッチRNA）であっても、逆転写可能です。

最適化されたバッファーとの組みあわせで熱安定性トランスクリプター リバーストランスクリプターゼとの高い二次構造を克服しました。

• 便利なキットで時間と労力を節約します。

ピペッティング工程を最小化し、PCR等級dNTPとホットスタート成分を含むプレミックス酵素ブレンドと最適化バッファーを用いることによって、コンタミを防ぎます。

• RNAサンプルを保護します:

他のRNase阻害因子が機能しない時に、ワンステップRT-PCR中に機能する付属の熱安定性Protector RNase InhibitorでRNaseによるRNAサンプルの劣化を防ぎます。

• 結果の信頼性を高めます:

付属のコントロール反応を用いてパフォーマンスをモニタリングします。

トランスクリプターワンステップRT-PCRキットの各ロットは、RT-PCRで機能テストされています。RT-PCRは、1000コピーのHAV RNA、 in vitro転写(カタログ番号04 655 877 001でも提供)で実行されます。コントロール反応セットアップと246 bp HAV RNAフラグメントに対するプライマーでのその後のRT-PCRは、添付文書に提示された標準的なRT-PCRプロトコル(+50℃、30分の逆転写)で実行されます。ターゲットの1000コピーで、明瞭に見えるバンドがアガロースゲル電気泳動とエチジウムブロマイド染色の後に取得されます。
さらに、RT-PCRは、ヒト肝臓総RNAの希釈系列 (10 ng、 1 ng、 0.1 ng)で行われます。ApoBの2.5 kbフラグメント特異的プライマーでのRT-PCRは、添付文書に提示された標準的なRT-PCRプロトコル(+50℃、30分の逆転写)で実行されます。1ngのRNAで、明瞭に見えるバンドがアガロースゲル電気泳動とエチジウムブロマイド染色の後に取得されます。

• トランスクリプターリバーストランスクリプターゼ、Protector RNase Inhibitor、Expand Systemを含むRT-PCR酵素ミックス
• ホットスタート媒介成分およびdNTPを含むRT-PCRリアクションバッファ-5倍濃縮
• PCR等級水
• コントロールRNA - HAV RNA in vitro 転写 *
• コントロールプライマーミックス HAV RNA （フォワードおよびリバースプライマー）*

*50反応パックサイズにのみ含まれています。

生命科学研究専用です。診断手順には使用しません。