uPA活性アッセイキット

ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（uPA）は、52 kDaのセリンプロテアーゼで、組織リモデリング1、血管新生2、線維素溶解、腫瘍の広がりなど、多くの生理学的・病理学的プロセスに関係しています。 uPAは、細胞表面受容体に結合すると、単鎖プロフォームuPAから活性型2鎖HMW-uPAに変換されます。 uPAは、プラスミノーゲンおよびマトリックスメタロプロテアーゼの活性化を伴うカスケードを介して、基底膜分解に役割を果たすことが示されています3。 uPAの阻害薬は、原発性腫瘍の成長と転移を遅らせることが示されています4-7。

CHEMICON uPA活性アッセイキットは、uPA活性評価のためおよびuPA阻害薬のスクリーニングのための、迅速で効率の良い高感度なシステムとなります。 このアッセイは比色法であり、放射能または蛍光装置は必要ありません。 このアッセイは、0.05～50単位のuPA活性の範囲で高感度です。

原理：

CHEMICON uPA活性アッセイキットは、活性化uPAによって切断される発色基質を使用します。 uPAを含むサンプルにこの基質を加えると、405 nmの光学密度（OD405）で検出可能な有色生成物が生成されます。

用途：

CHEMICON uPAアッセイキットは、精製産物や細胞培養物、および敗血症などの病的状態の血清中のuPA活性の測定に最適です。 このアッセイは、uPAの酵素活性の阻害剤のスクリーニングにも役立ちます。

各CHEMICON uPA活性アッセイキットには、ポジティブコントロールとしてのヒト尿のuPAを含めて、96サンプルの評価に十分な試薬が含まれています。 デュプリケートまたはトリプリケートで試験することをお勧めします。

CHEMICON uPA活性アッセイキットは、研究用途のみを意図しており、診断用途や治療用途には使用できません。

uPA活性アッセイのサンプル調製の注意点



血漿： 10分以上安静にした後、うっ血は最小限にして、肘脈の静脈穿刺を行います。 最初の数ミリリットルの血液は廃棄します。 ポリカーボネートチューブに、0.11 mol/Lの冷クエン酸ナトリウム1容量に対して9容量の割合で血液を採取し、穏やかに混ぜて氷上に置きます。 次に、冷却遠心機で遠心分離し（30 分、2000g）、乏血小板血漿を調製します。 0.3 mL～0.6 mLの血漿サンプルを瞬間凍結し、－60℃で保存します。使用前に、37℃の湯浴で血漿を急速解凍し、氷上に置きます。



組織： 組織からのuPAの抽出については多数の文献が報告されています。 膜画分からのuPAの抽出に適したバッファーには、Triton X100が必要です。 非界面活性剤抽出物（細胞質画分とも呼ばれる）にはTritonは不要ですが、膜画分は超遠心分離によって除去されるため、膜画分に関連するuPA活性は、細胞質のみを測定することで回避できます。uPAの抽出手順を説明した参考文献については、査読済み論文を参照してください。

細胞培養： 細胞培養上清を分離し、直接使用します。

研究のカテゴリー
細胞構造

キットは、－20℃で最長6カ月保存できます。 溶解後、uPAポジティブコントロールは－70℃で、基質は2～8℃で保存してください。

uPAポジティブコントロール：（Part No. 90058）1000単位のヒト尿のuPAを凍結乾燥したバイアル1本。

発色基質：（Part No. 90057）pNA基を含むトリペプチド5 mgのボトル1本。

アッセイバッファー10X：（Part No. 90091）5 mLボトル1本。

感度：1単位は、Johnsonらの線溶法により試験された国際標準に相当する酵素量と定義されています {Johnson, A.J., et al. 1969.Thromb.Diath.Haemorrh.21, 259.}

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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