脂肪生成アッセイ

肥満は、糖尿病やアテローム性動脈硬化症など、生命を脅かす疾患の原因となる重大な臨床的問題です。 脂肪細胞への分化が誘導可能な複数の細胞タイプを研究することにより、脂肪組織の形成過程である脂肪新生がより良く理解されるようになりました。 最もよく特徴づけられた最初の in vitro 脂肪生成モデルは、スイス 3T3 マウス細胞株の亜株である、3T3-L1 細胞株です（Kehinde and Green, 1974）。 通常の条件下で増殖した 3T3-L1 細胞は線維芽性表現型を有しています。 しかし、デキサメタゾン、イソブチルメチルキサンチン（IBMX また はMIX）、インスリンの組み合わせで処理すると、3T3-L1 細胞は丸みを帯びた表現型をとり、脂質滴の形で、5 日以内に細胞内に脂質を蓄積し始めます（図1。Rubin et al., 1978）。 もう一つの細胞株である 3T3-F442A は、後の段階で分化が阻害され、分化にはインスリンのみを必要とします。

脂肪形成の生化学的経路は、3T3-L1 モデルを用いることにより、次第によく理解されるようになってきました（概説：Gregoire et al., 1998; Rosen et al., 2000）。 細胞をデキサメタゾンで処理すると、転写因子 CCAAT／エンハンサー結合タンパク質 b（C／EBPb）が活性化されます。 IBMX は可溶性環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害し、細胞内 cAMP レベルを上昇させます（Elks and Manganiello, 1985）。 核レベルでは、IBMX で処理すると、関連する転写因子 C/EBPd が活性化されます。 次いで、C/EBPb と d が C/EBPa と PPARγ の転写を誘導します。 誘導因子に曝露されてから 3 日以内に、細胞は分化に必要な有糸分裂クローン増殖と呼ばれる分裂を 2 回繰り返します（Tang et al., 2003）。 インスリンやインスリン様成長因子-1 は PI3 キナーゼや Akt の活性を高めることにより脂肪細胞の分化を促進します。 フォークヘッド転写因子 Foxo1 の活性の調節は、インスリンが脂肪細胞の分化を促進する上で必要であると考えられています（Nakae et al., 2003）。 C/EBPa と PPARγ は脂肪酸合成酵素、脂肪酸結合タンパク質、レプチン、アディポネクチンなどの脂肪細胞特異的遺伝子の発現を活性化することにより、脂肪形成の最終段階を制御します。

Pref-1やWnt-10bのような脂肪細胞分化の内因性ネガティブレギュレーターは、未分化の3T3-L1細胞に高発現しており、脂肪細胞分化誘導因子を加えると発現が低下します（Ross et al., 2000; Mei et al., 2002）。 また、腫瘍壊死因子α（TNFa）やトランスフォーミング増殖因子β（TGF-b）のようなサイトカインは脂肪細胞の分化を阻害します（Gregoire et al., 1998）。

脂肪形成の制御因子が同定されたことで、薬理学的な手段によって肥満を予防したり、回復させたりできる可能性が出てきました。 PPARγは、脂肪細胞分化の最終段階に必須であり、抗糖尿病薬のチアゾリジンジオンクラスの薬理学的標的であることから、標的として特に注目されています。 チアゾリジン系薬剤の脂肪生成促進作用により、脂肪生成を促進することなく抗糖尿病活性を有する化合物の同定が注目されています。 さらに、脂肪新生を阻害する PPARγ 活性阻害剤も同定されており、有効な抗肥満薬開発の基礎となる可能性があります(Wright et al., 2000; Camp et al., 2001)。

Chemicon の 脂肪生成アッセイは、従来の 3T3-L1 モデルにおける脂肪生成の誘導と分析に便利なフォーマットです。 最も一般的に使用される脂肪生成誘導剤であるデキサメタゾン、IBMX、インスリンは、すぐに使用できる便利な製剤として提供されています。 さらに、分化した脂肪細胞を染色するための試薬も用意されており、研究者は脂肪形成の誘導物質と阻害物質について定量的な情報を得ることができます。 成熟脂肪細胞に存在する脂質滴の染色には、オイルレッド O 溶液を使用します。 細胞層から遊離したオイルレッド O を除去するための洗浄液が付属しています。 また、分光光度計による測定用に、脂質に結合したオイルレッド O を抽出する色素抽出液も含まれています（図 2）。

研究カテゴリー
細胞構造

脂肪生成アッセイは、従来の 3T3-L1 モデルにおける脂肪生成の誘導 & 分析に便利なフォーマットです。

注記：キットの内容物には 2 つの異なる保管温度が必要です。

デキサメタゾン溶液、IBMX 溶液、インスリン溶液は -20℃ で保存してください。 オイルレッド O 溶液、洗浄液、色素抽出溶液は室温で保存してください。

IBMX 溶液（カタログ番号 90355）- バイアル 1 本に DMSO 中 0.5 M 3-イソブチル-1-メチルキサンチン（IBMX）250 μl を含有。
インスリン溶液（カタログ番号 90356） - バイアル1本中に 10 mg/mL の組換えヒトインスリン 250 μl を含有。
デキサメタゾン溶液（カタログ番号 90357） - バイアル 1 本に 10 mM デキサメタゾン（エタノール中）100 μl を含有。
オイルレッド O 溶液（カタログ番号 90358）- ボトル 1 本に 60% イソプロパノールに溶解した 0.36% オイルレッド O 溶液 60 mL を含有。
洗浄液 - （カタログ番号 90360）- ボトル 2 本にそれぞれ 250 mL の洗浄液を含有。
色素抽出溶液 - （カタログ番号 90359）- ボトル 1 本に 30 mL の色素抽出溶液を含有。

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

メルクのカタログまたは製品に添付されたメルクのその他の文書に記載されていない場合、メルクの製品は研究用途のみを目的としているため、他のいかなる目的にも使用することはできません。このような目的としては、未承認の商業用途、in vitroの診断用途、ex vivoあるいはin vivoの治療用途、またはヒトあるいは動物へのあらゆる種類の消費あるいは適用などがありますが、これらに限定されません。